[發明專利]一種分離純化高純度重組人血清白蛋白的層析方法有效
| 申請號： | 201210559390.7 | 申請日： | 2012-12-21 |
| 公開（公告）號： | CN103880947A | 公開（公告）日： | 2014-06-25 |
| 發明（設計）人： | 楊代常;施波;施倩妮;歐吉權;劉靜茹 | 申請（專利權）人： | 武漢禾元生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/765 | 分類號： | C07K14/765;C07K1/20;C07K1/18 |
| 代理公司： | 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006 | 代理人： | 黃韌敏 |
| 地址： | 430079 湖北省*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 分離 純化 純度 重組 血清 白蛋白 層析 方法 | ||
1.一種分離純化高純度重組人血清白蛋白的層析方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)將重組人血清白蛋白粗提取物經陽離子交換層析，在緩沖液中加入乙醇以去除內毒素，得到初級產物I；
2)將初級產物I經陰離子交換層析，得到中級產物II；
3)將中級產物II經疏水層析，得到高純度的重組人血清白蛋白目標物。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述陽離子交換層析的陽離子/疏水復合填料為Capto-MMC或Bestarose?Diamond?MMC。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述陰離子交換層析的陰離子/疏水復合填料為Capto-Adhere或Bestarose?Diamond?MMA。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，其中疏水層析的填料為PhenylSepharose?HP、Phenyl?Sepharose?FF、Phenyl?Bestarose?HP或Phenyl?Bestarose?FF。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述緩沖液包括洗雜緩沖液、平衡緩沖液I和平衡緩沖液II；其中洗雜緩沖液含體積比為10-20％的無水乙醇，平衡緩沖液I含體積比為0-10％的無水乙醇，平衡緩沖液II含體積比為5-15％的無水乙醇。
6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述洗雜緩沖液含15％的無水乙醇，平衡緩沖液II含10％的無水乙醇。
7.如權利要求5所述的方法，其中洗雜緩沖液含有：無水乙酸鈉2g/L，15％無水乙醇，用NaCl調節電導至83mS/cm，用乙酸調節pH至pH4.6-5.0。
8.如權利要求5所述的方法，其中平衡緩沖液I為：無水乙酸鈉2g/L，NaCl15g/L，乙酸調至pH4.2-4.8。
9.如權利要求5所述的方法，其中平衡緩沖液II為：無水乙酸鈉2g/L，NaCl15g/L，10％無水乙醇，乙酸調至pH4.2-4.8。
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