[發明專利]小分子RNA作為結核病標記物的應用

無效

• 申請號: 201210559345.1
• 申請日: 2012-12-20
• 公開（公告）號: CN103882095A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 鐘球;周琳;李海成;陳濤
• 申請（專利權）人: 廣東省結核病控制中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 張海文

技術領域

本發明屬于分子診斷領域，具體涉及小分子RNA作為結核病標記物的應用。

背景技術

結核分支桿菌引起感染和死亡。世界衛生組織估算全球1/?3?的人口受結核菌感染,其主要原因是多重耐藥結核菌(multidrug?resistance?tuberculosiscle?bacillus?,MDR-TB)?的流行以及人類免疫缺陷病毒(human?immune?deficiency?virus?,?HIV)?感染、器官移植、免疫抑制劑使用等所致免疫損害宿主(immuno-compromised?host?,?ICH)?增多和高齡人口中機體免疫力低下等因素,使結核分支桿菌感染難以控制。為了進一步提高結核病的診斷、治療和預防控制水平,現在迫切需要更為精確快速的診斷新技術用于臨床標本分離和鑒定結核分支桿菌。

目前臨床現有結核病診斷技術根據每種技術所針對的靶標不同可分為三大類。微生物學方法、血清學方法、分子生物學方法。

微生物學方法以涂片和各種培養方法為代表。其中的涂片法比較迅速，一般1個小時可以出結果，但是陽性率只有20%左右。羅氏培養法目前作為結核病診斷的金標準，所需要周期長，一般4-8周，而結核病強化期的治療是2個月。如果等培養結果出來在對患者進行干預，將會延誤治療；但如果不等培養結果即進行治療，又可能因為誤診使患者承受抗結核藥物副作用所帶來的痛苦。

而關于血清學方法，WHO已經發表公開聲明，目前市場上所應用的血清學結核病診斷方法都不能取得滿意的結果。

分子生物學方法是近來發展比較迅速的一個領域，各種方法都是以結核分枝桿菌的RNA或者DNA為靶標。但是該類方法所面臨的問題是未能找到一個另人滿意的靶標。

發明內容

針對現有技術所存在的問題，本發明的目的在于提供一種以小分子RNA為標記物，通過逆轉錄、實時熒光定量PCR技術對結核病進行診斷的試劑盒。

本發明所采取的技術方案是：

一種結核病的診斷試劑盒，其包括檢測一種或多種小分子RNA的特異性PCR引物，所述小分子RNA包括hsa-miR-92a、hsa-miR-122、hsa-let-7a、hsa-miR-486-5p、hsa-let-7b、hsa-miR-451、hsa-miR-320b、hsa-miR-320a、hsa-miR-192和hsa-miR-185。

其中，檢測hsa-miR-92a的引物為：

RT-PCR引物：

GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACACAGGC（SEQ?ID?NO:1）

realtime-F：GCGCGCTATTGCACTTGTCCCG（SEQ?ID?NO:2）

realtime-R：GTGCAGGGTCCGAGGT（SEQ?ID?NO:3）

檢測hsa-miR-122的引物為：

RT-PCR引物：

GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCAAACA（SEQ?ID?NO:4）

realtime-F：GCGCGCTGGAGTGTGACAATGG（SEQ?ID?NO:5）

realtime-R：GTGCAGGGTCCGAGGT（SEQ?ID?NO:6）

檢測hsa-let-7a的引物為：

RT-PCR引物：

GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACAACTAT（SEQ?ID?NO:7）

realtime-F：GCGCGCTGAGGTAGTAGGTTGT（SEQ?ID?NO:8）

realtime-R：GTGCAGGGTCCGAGGT（SEQ?ID?NO:9）

檢測hsa-miR-486-5p的引物為：

RT-PCR引物：

GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCTCGGG（SEQ?ID?NO:10）

realtime-F：GCGCTCCTGTACTGAGCTGC（SEQ?ID?NO:11）

realtime-R：GTGCAGGGTCCGAGGT（SEQ?ID?NO:12）

檢測hsa-let-7b的引物為：

RT-PCR引物：