[發(fā)明專利]心型脂肪酸結(jié)合蛋白含量檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210557386.7
• 申請日: 2012-12-20
• 公開（公告）號: CN103123319A
• 公開（公告）日: 2013-05-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 華權(quán)高;沈鶴宵;許可;黃愛;舒芹;鄢寶;常向博
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢生之源生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 北京市德權(quán)律師事務(wù)所 11302
• 代理人: 劉麗君

1.一種心型脂肪酸結(jié)合蛋白含量檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒由彼此獨(dú)立的試劑Ⅰ和試劑Ⅱ組成；其中，所述試劑Ⅰ的組分包括：生物緩沖劑、表面活性劑、促凝劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、阻斷劑、螯合劑和水；所述試劑Ⅱ的組分包括：包被心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體的膠乳顆粒、生物緩沖劑、螯合劑、表面活性劑、防腐劑、助懸劑、封閉劑、穩(wěn)定劑和水。

2.按照權(quán)利要求1所述的心型脂肪酸結(jié)合蛋白含量檢測試劑盒，其特征在于：所述包被心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體的膠乳顆粒的粒徑為90-200nm，優(yōu)選為120-160nm，最優(yōu)選為135nm。

3.按照權(quán)利要求1或2所述的心型脂肪酸結(jié)合蛋白含量檢測試劑盒，其特征在于：所述包被心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體的膠乳顆粒采用化學(xué)交聯(lián)法制備得到。

4.按照權(quán)利要求1或2所述的心型脂肪酸結(jié)合蛋白含量檢測試劑盒，其特征在于，所述包被心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體的膠乳顆粒的制備方法包括：（1）活化膠乳；（2）向活化后的膠乳中加入心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體進(jìn)行膠乳致敏反應(yīng)；（3）封閉、洗滌，即得。

5.按照權(quán)利要求4所述的心型脂肪酸結(jié)合蛋白含量檢測試劑盒，其特征在于，步驟（1）所述的活化膠乳包括以下步驟：將粒徑為90-200nm的聚苯乙烯膠乳溶液用活化緩沖液稀釋后加入溶有活化劑的活化緩沖液，混合均勻，置于恒溫?fù)u床上反應(yīng)；待反應(yīng)完成后加入淬滅劑，混合均勻，繼續(xù)置于恒溫?fù)u床上反應(yīng)；優(yōu)選的，按重量比計(jì)，所述的聚苯乙烯膠乳溶液的濃度為5-10%；所述的恒溫是10-40℃的溫度，優(yōu)選為25℃；所述的活化緩沖液為磷酸鹽緩沖液，優(yōu)選為0.12M磷酸鹽緩沖液；所述的活化劑是碳化二亞胺；所述的淬滅劑為2-巰基乙醇；

步驟（3）中所述封閉包括：加入反應(yīng)終止液終止致敏反應(yīng)后，再加入封閉溶液，進(jìn)行封閉反應(yīng)；所述的反應(yīng)終止液為乙醇胺溶液。

6.按照權(quán)利要求1和2所述的心型脂肪酸結(jié)合蛋白含量檢測試劑盒，其特征在于：所述的心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體是心型脂肪酸結(jié)合蛋白單克隆抗體或多克隆抗體。

7.按照權(quán)利要求1所述的心型脂肪酸結(jié)合蛋白含量檢測試劑盒，其特征在于：試劑Ⅰ或試劑Ⅱ中所述的生物緩沖劑是三羥甲基氨基甲烷；試劑Ⅰ或試劑Ⅱ中所述的螯合劑是乙二胺四乙酸二鈉；試劑Ⅰ或試劑Ⅱ中所述的防腐劑是Proclin300；試劑Ⅰ中所述的穩(wěn)定劑是氯化鈉或/和蔗糖，試劑Ⅱ所述的穩(wěn)定劑是蔗糖；試劑Ⅰ或試劑Ⅱ中所述的表面活性劑是曲拉通100；所述的阻斷劑是類風(fēng)濕因子阻斷劑；所述促凝劑是聚乙二醇8000；所述的封閉劑是牛血清白蛋白；所述的助懸劑是乙二醇。

8.按照權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒，其特征在于：每1升試劑Ⅰ中各組分的用量為：生物緩沖劑5-110g，表面活性劑0.05-3mL，促凝劑2-50g，防腐劑1-10mL，穩(wěn)定劑1-60g，阻斷劑1-10mL，螯合劑0.1-10g，余量為水；優(yōu)選的，每1升試劑Ⅰ中各組分的用量為：生物緩沖劑5-30g，表面活性劑0.1-2mL，促凝劑6-25g，防腐劑2-6mL，穩(wěn)定劑5-40g，阻斷劑2-6mL，螯合劑0.5-4g；更優(yōu)選的,每1升試劑Ⅰ中各組分的用量為：生物緩沖劑15g，表面活性劑0.5mL，促凝劑15g，防腐劑4mL，穩(wěn)定劑20g，阻斷劑4mL，螯合劑2g；

每1升試劑Ⅱ中各組分的用量為：包被心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體的膠乳顆粒0.1-10g，生物緩沖劑5-100g，螯合劑0.1-10g，表面活性劑0.05-3mL，防腐劑1-10mL，助懸劑5-50mL，封閉劑5-50g，穩(wěn)定劑50-150g，余量為水；優(yōu)選的，每1升試劑Ⅱ中各組分的用量為：包被心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體的膠乳顆粒0.5-5g，生物緩沖劑5-30g，螯合劑0.5-5g，表面活性劑0.5-3mL，防腐劑2-6mL，助懸劑10-30mL，封閉劑6-20g，穩(wěn)定劑60-100g；更優(yōu)選的，每1升試劑Ⅱ中各組分的用量為：包被心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體的膠乳顆粒2g，生物緩沖劑15g，螯合劑2g，表面活性劑1.5mL，防腐劑4mL，助懸劑20mL，封閉劑10g，穩(wěn)定劑80g。

9.按照權(quán)利要求1-3任何一項(xiàng)的檢測試劑盒，其特征在于：試劑Ⅰ的pH值的范圍為7.0-8.0，試劑Ⅱ的pH值的范圍為6.5-8.5。

10.一種制備權(quán)利要求1-9任何一項(xiàng)所述檢測試劑盒的方法，包括：（1）制備試劑Ⅰ：將各組分溶解于蒸餾水或雙蒸水中，混合均勻，定容；（2）制備試劑Ⅱ：將試劑Ⅱ中的生物緩沖劑，螯合劑，表面活性劑，防腐劑，助懸劑，封閉劑，穩(wěn)定劑溶解于蒸餾水或雙蒸水中，混合均勻，后向溶液中加入包被抗體的膠乳顆粒，充分?jǐn)嚢瑁旌暇鶆颍ㄈ荩唬?）將試劑Ⅰ和試劑Ⅱ單獨(dú)分裝，密封，即得。