[發明專利]一種從蘿卜皮中分離制備四種天竺葵素衍生物的方法

有效

• 申請號: 201210557286.4
• 申請日: 2012-12-19
• 公開（公告）號: CN103130851A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發明（設計）人: 敬璞;錢柄俊;趙淑娟;隋中泉;孫向軍
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C07H17/065
• 分類號: C07H17/065;C07H1/08
• 代理公司: 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

1.一種從蘿卜皮中分離制備四種高純度酰基化花色苷單體的方法，包括以下步驟：

(1)原料預處理：將新鮮的蘿卜洗凈、剝皮，并將得到的蘿卜皮切碎；

(2)蘿卜花色苷粗提濃縮液：將得到的蘿卜皮，按照料液比1g∶2mL的比例加入0.01％(v/v)鹽酸的甲醇溶液中，常溫下，浸提，過濾，反復三次，然后合并濾液，在40-45℃下真空旋轉蒸發除去甲醇得到花色苷粗提液，按所述粗提液∶乙酸乙酯的體積比為1∶2的比例加入乙酸乙酯萃取，靜置分層，萃取三次，收集合并水相，在40-50℃下真空旋轉充分蒸發除去乙酸乙酯，得到花色苷浸膏；將所述浸膏用少量的0.01％(v/v)鹽酸的水溶液溶解，得到花色苷上樣液；

(3)大孔樹脂吸附：將大孔吸附樹脂裝入層析柱中，用0.01％(v/v)鹽酸的水溶液沖洗；將所述花色苷上樣液以0.5BV/h的流速注入大孔樹脂柱中，先用含0.01％的鹽酸(v/v)的去離子水以1BV/h沖洗樹脂，再用0.01％(v/v)的鹽酸的甲醇溶液以1BV/h的洗脫，收集顏色明顯的流出液，將收集到的洗脫液在40-45℃下真空旋轉蒸發除去甲醇，得到花色苷粗品；

(4)凝膠純化：將從大孔樹脂純化得到的花色苷粗品注入凝膠柱，用50％的甲醇水(v/v)洗脫，按照每10分鐘接取一次，收集洗脫液，將收集到的洗脫液在40-45℃下真空旋轉蒸發除去甲醇，得到初步純化的花色苷提取物；

(5)單體制備：利用半制備色譜分離所述花色苷提取物，采用程序1，采用常規的C18制備色譜柱，柱溫20-40℃；DAD檢測器：檢測波長為520nm；根據出峰時間，依次收集到3-[(6-p-香豆酰)-D-吡喃葡萄糖基-(2→1)-D-吡喃葡萄糖苷]-5-D-吡喃葡糖苷天竺葵素、3-[(6-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖基-(2→1)-D-吡喃葡萄糖苷]-5-D-吡喃葡糖苷天竺葵素、3-[(6-p-香豆酰)-D-吡喃葡萄糖基-(2→1)-D-吡喃葡萄糖苷]-5-[(6-丙二酰)-D-吡喃葡糖苷]-天竺葵素、3-[(6-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖基-(2→1)-D-吡喃葡萄糖苷]-5-[(6-丙二酰)-D-吡喃葡糖苷]-天竺葵素四種花色苷單體；對首次分離得到的純度較低的3-[(6-p-香豆酰)-D-吡喃葡萄糖基-(2→1)-D-吡喃葡萄糖苷]-5-D-吡喃葡糖苷天竺葵素、3-[(6-阿魏酰)-D-吡喃葡萄糖基-(2→1)-D-吡喃葡萄糖苷]-5-D-吡喃葡糖苷天竺葵素再用程序2分別進行二次分離，得到純度較高的花色苷單體；進一步濃縮，在40-45℃下，真空旋轉蒸發濃縮，得到所述四種花色苷單體；

所述鹽酸的濃度為12M，所述甲醇、所述乙酸乙酯、所述磷酸、所述甲酸和所述乙腈均為色譜純。

2.如權利要求1所述的方法，其中，所述大孔吸附樹脂為XAD-7HP，比表面積為500m²/g，平均孔徑為平均粒徑為560μm，偶極距為1.8，均一系數D90/D40為1.7。

3.如權利要求1所述的方法，其中，所述層析柱的直徑為50mm，長度為600mm。

4.如權利要求1所述的方法，其中，所述凝膠柱為Sephadex?LH-20，所述凝膠柱直徑為10mm，長度為300mm。

5.如權利要求1所述的方法，其中，所述程序1所用流動相分別為，A相：4％(v/v)磷酸的純水，B相：100％乙腈；梯度洗脫條件為0-30min：5％-30％(v/v)B相；30-35min：30％(v/v)B相；35-37min：30％-5％(v/v)B相；流速3mL/min。

6.如權利要求1所述的方法，其中，所述程序2所用流動相分別為，A相：0.5％(v/v)甲酸的純水，B相：0.5％(v/v)甲酸的甲醇，(色譜純)；梯度洗脫條件為0-10min：25％-45％B相；10-15min：45％B相；15-20min：45％-25％B相。