[發(fā)明專利]Citrin缺陷病致病基因SLC25A13高頻突變篩查試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210556771.X
• 申請日: 2012-12-19
• 公開（公告）號: CN103060441A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋元宗;張占會
• 申請（專利權(quán)）人: 暨南大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉;陳燕嫻

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及Citrin缺陷病致病基因SLC25A13高頻突變(I型、III型、X型和XIX型)篩查引物及試劑盒。

背景技術(shù)

Citrin蛋白是由SLC25A13基因編碼的一種位于線粒體內(nèi)膜上的鈣調(diào)節(jié)載體蛋白，主要在肝臟中表達(dá)。Citrin蛋白作為鈣結(jié)合性線粒體溶質(zhì)載體(Aspaetate-Glutamate?Carrier,AGC)，其功能一是作為天冬氨酸的運(yùn)載體向細(xì)胞質(zhì)內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)天冬氨酸，提供尿素、蛋白及核苷酸合成材料；二是作為線粒體內(nèi)膜上天冬氨酸-蘋果酸屏障的組成部分向線粒體內(nèi)提供還原型煙酰胺腺嘌吟二核甙酸(NADH)應(yīng)用于糖的分解代謝；三是通過調(diào)節(jié)還原型煙酰胺腺嘌吟二核甙酸(NADH)的比例參與糖異生過程。

SLC25A13基因突變導(dǎo)致其所編碼的citrin蛋白功能不足或喪失，引發(fā)一系列生化代謝紊亂，并最終形成臨床表型及預(yù)后各不相同的以肝臟損害為突出臨床表現(xiàn)的常染色體隱性遺傳病-Citrin缺陷病(Citrin?Deficiency,CD)。CD主要臨床表型可分為三種，分別為Citrin缺陷導(dǎo)致的新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥(NeonatalIntrahepatic?Cholestasis?caused?by?Citrin?Deficiency,NICCD,OMIM#605814)、成人發(fā)病瓜氨酸血癥II型(Adult-onset?CitrullinemiaType?II,CTLN2,OMIM#603471)和Citrin缺陷導(dǎo)致的生長發(fā)育落后和血脂異常(Failure?to?Thrive?and?Dyslipidemia?caused?by?Citrin?Deficiency,FTTDCD)。NICCD主要發(fā)病于新生兒或小嬰兒，以圓胖臉、肝大、黃疸及肝功能異常為主要表現(xiàn)，若早期干預(yù)治療大部分預(yù)后良好；CTLN2主要發(fā)病于11歲以上的兒童或是成人，以高氨血癥導(dǎo)致的神經(jīng)精神癥狀為突出臨床表現(xiàn)，往往預(yù)后不良，需要肝臟移植；FTTDCD是不同于NICCD及CTLN2的一種新的臨床表現(xiàn)型，它主要表現(xiàn)為生長發(fā)育落后和血脂異常。

流行病學(xué)調(diào)查研究顯示SLC25A13基因變異頻率在中國分布呈現(xiàn)明顯的地區(qū)差異，長江以南地區(qū)人群SLC25A13基因突變攜帶率(1/48)明顯高于長江以北地區(qū)(1/940)，提示該病在我國有較高的發(fā)病率，尤其是長江以南及長江沿線地區(qū)。在已發(fā)現(xiàn)的SLC25A13基因突變類型中，I型(851del4)、III型(1638-1660dup)、X型(IVS6+5G>A)和XIX型(IVS16ins3kb)這四種突變類型約占總突變的85%，為我國人群的高頻突變類型。

Citrin缺陷病的臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，至今尚未建立成熟的臨床和生化診斷標(biāo)準(zhǔn)，SLC25A13基因突變分析被認(rèn)為是診斷該病的必要手段。以往此基因的分析主要依靠基因測序，耗時且費(fèi)用高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的首要目的在于提供Citrin缺陷病致病基因SLC25A13高頻突變(I型、III型、X型和XIX型)篩查引物。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種Citrin缺陷病致病基因SLC25A13高頻突變篩查試劑盒。

本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)：

Citrin缺陷病致病基因SLC25A13高頻突變篩查引物，所述的高頻突變?yōu)镮型、III型、X型和XIX型突變，

I型突變的篩查引物為：

IF：5’-ggtatatttgttgcttgtgtttg-3’，IA：5’-tcttccagaggagcaatccg-3’；正常擴(kuò)增片段長度為82bp，突變后擴(kuò)增片段長度為78bp。

III型突變的篩查引物為：

IIIF：5’-tgttgtgtctctcctgcagg-3’，IIIA：5’-gcagtctatcactccgctgt-3’；正常擴(kuò)增片段長度為123bp，突變后擴(kuò)增片段長度為146bp。

X型突變的篩查引物為：

XF：5’-tgagggcttgttagatcaagat-3’，XA：5’-ttacccagacaacaaattaacct-3’；正常擴(kuò)增片段長度為467bp，突變后擴(kuò)增片段長度為467bp。

XIX型突變的篩查引物為：

XIXF：5’-gtatgcctgcagcatctttag-3’，XIXA：5’-tgcttcattcccaggaggga-3’；正常擴(kuò)增片段長度為881bp，突變后擴(kuò)增片段長度為3565bp。