[發明專利]一種影響骨骼礦化作用藥物的篩選系統

有效

• 申請號: 201210556336.7
• 申請日: 2012-12-19
• 公開（公告）號: CN103063630A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 韓利文;劉可春;蔡志杰;蕭崇德
• 申請（專利權）人: 山東省科學院生物研究所;力鈞生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N21/00
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 王緒銀

1.鈣黃綠素作為染劑在制備用于篩選礦化程度藥物篩選系統中的應用。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，步驟如下：

A、斑馬魚樣本前處理：在標準規格的細胞培養板中，加入1～30條發育至3天大的健康斑馬魚幼魚，加入藥物溶液，然后用胚胎培養液補至每培養孔中液體體積不小于1ml，加蓋封閉，28℃培養箱中培養72h～96h，得施藥斑馬魚；

B、染色：取施藥斑馬魚，加入鈣黃綠素溶液，鈣黃綠素溶液質量濃度為0.1~0.3%，染色1～2.5小時，制得染色斑馬魚；

C、清洗：將染色斑馬魚用胚胎培養液清洗，然后用胚胎培養液培養2～4h，再用胚胎培養液清洗魚體至胚胎培養液為無色；

D、熒光定量：在熒光條件下對顯示黃綠色熒光部分進行面積統計分析。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述的標準規格的細胞培養板，是指6孔、12孔、24孔、48孔、96孔細胞培養板。

4.一種鈣黃綠素為染劑的骨骼礦化作用的藥物篩選系統，其特征在于，包括：

受試組的斑馬魚胚胎：實驗前將健康成年斑馬魚放置在交配缸排卵，收集受精卵，放置在胚胎培養液中，在28℃、光照14h/黑暗10h的控光環境下培養3天，然后加入待篩選藥物溶液，繼續培養72h～96h，獲得受試藥物組；

陽性控制組的斑馬魚胚胎：實驗前將健康成年斑馬魚放置在交配缸排卵，收集受精卵，放置在胚胎培養液中，在28℃、光照14h/黑暗10h的控光環境下培養3天，然后加入陽性對照藥物溶液，繼續培養72h～96h，獲得陽性控制組；

陰性控制組的斑馬魚胚胎：實驗前將健康成年斑馬魚放置在交配缸排卵，收集受精卵，放置在胚胎培養液中，在28℃、光照14h/黑暗10h的控光環境下培養，時間與陽性控制組和受試組相同，獲得陰性控制組；

鈣黃綠素染劑：質量濃度為0.1~0.3%的鈣黃綠素溶液；用于對已礦化之骨頭進行活體熒光染色；

影像采集系統：用于對受試組的斑馬魚胚胎、陽性控制組的斑馬魚胚胎、陰性控制組的斑馬魚胚胎的魚體脊椎骨的位置進行影像采集，分別得到受試組的斑馬魚胚胎、陽性控制組的斑馬魚胚胎、陰性控制組的斑馬魚胚胎的魚體影像；

影像分析及統計軟件：用于對受試組的斑馬魚胚胎、陽性控制組的斑馬魚胚胎、陰性控制組的斑馬魚胚胎的魚體脊椎骨影像進行分析，分別得到受試組的斑馬魚胚胎的影像平均面積數值、陽性控制組的斑馬魚胚胎的影像平均面積數值以及陰性控制組的斑馬魚胚胎的影像平均面積數值。

5.如權利要求4所述的藥物篩選系統，其特征在于，所述陽性控制組的斑馬魚胚胎中陽性對照藥物為促進骨骼礦化作用的陽性對照藥物或者用于抑制骨骼礦化作用的陽性對照藥物，促進骨骼礦化作用的陽性對照藥物為阿侖唑奈，維生素D3，鈣三醇或副甲狀腺激素特立帕肽中的一種；抑制骨骼礦化作用的陽性對照藥物為6-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-3-(4-吡啶基)吡唑并[1，5-a]嘧啶。