[發明專利]一種人膀胱癌細胞化學發光檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201210555378.9
• 申請日: 2012-12-19
• 公開（公告）號: CN103033625A
• 公開（公告）日: 2013-04-10
• 發明（設計）人: 范祖森;張倩云;李翀;杜穎;王彥英;楊昭
• 申請（專利權）人: 中國科學院生物物理研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 北京市漢信律師事務所 11373
• 代理人: 王文生

1.一種用于檢測人膀胱癌細胞的試劑盒，所述試劑盒包括兩種特異識別膀胱癌細胞表面抗原的單克隆抗體。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，所述試劑盒包括：

1)膀胱癌EJ細胞標準品；

2)由特異識別膀胱癌細胞表面抗原的單克隆抗體包被的磁顆粒；

3)酶標記的特異識別膀胱癌細胞表面抗原的單克隆抗體；

4)3)中的酶所作用的化學發光底物；

5)反應管或微孔板，所述反應管或微孔板優選經過無蛋白封閉液的封閉處理，所述無蛋白封閉液為含有1.0％的魚水解明膠，pH7.2的0.02M磷酸鹽緩沖液；

6)與5)中的反應管或微孔板配套的磁分離器。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其中所述膀胱癌EJ細胞標準品為膀胱癌EJ細胞的逐級稀釋液。

4.根據權利要求2所述的試劑盒，其中，2)中所述的特異識別膀胱癌細胞表面抗原的單克隆抗體是由保藏號為CGMCC?No.6906的雜交瘤細胞株制備的單克隆抗體BCMab2，其與磁顆粒通過共價鍵結合。

5.根據權利要求2所述的試劑盒，其中，2)中所述的磁顆粒是粒徑為100nm至1μm的氧化硅羥基磁顆粒。

6.根據權利要求2所述的試劑盒，其中，3)中所述的酶標記的特異識別膀胱癌細胞表面抗原的單克隆抗體是酶標記的BCMab1單克隆抗體，所述BCMab1單克隆抗體由保藏號為CGMCC?No.3845的雜交瘤細胞株制備。

7.根據權利要求2所述的試劑盒，其中，3)中所述的酶是辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶或熒光素酶。

8.根據權利要求2所述的試劑盒，其中，5)中所述的反應管是具有光學透明度的聚苯乙烯管、聚乙烯管、聚丙烯管或者玻璃管；所述微孔板是適用于化學發光反應的檢測的白色微孔板。

9.制備根據權利要求1或2所述的試劑盒的方法，所述方法包括以下步驟：

1)配制膀胱癌EJ細胞標準品：對膀胱癌EJ細胞溶液進行逐級稀釋以制成膀胱癌EJ細胞的逐級稀釋液；

2)制備鏈酶親合素修飾的磁顆粒；

3)分別使用保藏號為CGMCC?No.3845和CGMCC?No.6906的兩株單克隆雜交瘤細胞株制備可特異識別膀胱癌細胞表面抗原的單克隆抗體BCMab1和BCMab2；

4)制備生物素化的單克隆抗體BCMab2：在微堿性條件下將生物素-N-羥基琥珀酰亞胺與所述抗體的游離賴氨酸發生偶聯反應；

5)使用2)中制備的鏈酶親合素修飾的磁顆粒和4)中制備的生物素化的單克隆抗體BCMab2，通過鏈酶親合素與生物素的特異性結合反應，制備由生物素化的單克隆抗體BCMab2包被的磁顆粒；

6)制備酶標記的單克隆抗體BCMab1：采用碳化二亞胺(EDC)偶聯法，實現所述抗體上的氨基與所述酶分子上的羧基的結合；

7)配制6)中的酶所作用的化學發光底物液；

8)組裝為成品。

10.根據權利要求9所述的方法，所述方法還包括以下步驟：

a)在所述由生物素化的單克隆抗體BCMab2包被的磁顆粒的制備后，用封閉液封閉所制備的由生物素化的單克隆抗體BCMab2包被的磁顆粒以降低非特異性吸附，所述封閉液包含0.2％～1.0％牛血清白蛋白、0.5％～1.0％酪蛋白、0.5％～1.0％的魚水解明膠，pH7.2的0.02M磷酸鹽緩沖液；和

b)用無蛋白封閉液封閉反應管和微孔板，所述無蛋白封閉液為含有1.0％的魚水解明膠，pH7.2的0.02M磷酸鹽緩沖液。