[發明專利]一種先導化合物的合成及篩選方法與試劑盒

有效

• 申請號: 201210555088.4
• 申請日: 2012-12-20
• 公開（公告）號: CN103882531A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 李進;竇登峰;陳仰;王星;江洋;陳湜;瞿慶喜;萬金橋;鐘麗娜;葛嘯虎;黃奇
• 申請（專利權）人: 成都先導藥物開發有限公司
• 主分類號: C40B40/04
• 分類號: C40B40/04;C40B50/04;C40B20/04;C40B70/00
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

1.一種先導化合物的合成及篩選方法，其特征在于：它包括如下步驟：

（1）取原料：i種合成砌塊與（i+2）種單鏈DNA片段，（i+2）種單鏈DNA片段包括i種標記序列、一種始端序列和一種末端序列，i種標記序列分別特異標記i種合成砌塊，其中，i=1，2，3…n；

（2）用組合化學方法合成化合物文庫：

a、制備初始合成砌塊：選擇1~i種合成砌塊用熒光標記，再將始端序列的一端連接在合成砌塊上，另一端與所述合成砌塊的特異標記序列串聯連接，得到1~i種標記有一端游離的單鏈DNA的初始合成砌塊；

b、用步驟a得到的初始合成砌塊，與1~i種合成砌塊，用線性組合反應的方式合成化合物，合成過程中，每加入新的合成砌塊，就在與初始合成砌塊相連的單鏈DNA游離端串聯連接所加入合成砌塊的特異標記序列，使所述單鏈DNA逐漸延長，合成結束后，在所述單鏈DNA游離端串聯連接末端序列，即得到單鏈DNA標記的化合物文庫；

（3）篩選：對DNA標記的化合物的文庫進行篩選，選出目標化合物；

（4）測序：將步驟（3）篩選得到的目標化合物的DNA進行測序，確定目標化合物的合成砌塊和反應歷程。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1）所述始端序列包括多聚腺苷。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述多聚腺苷為12~20個腺苷。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1）所述標記序列的長度不低于6bp。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述標記序列的長度為9bp。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1）所述標記序列的3’端連接一個核糖核苷酸。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述核糖核苷酸為胞苷。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2）中，a步驟所述熒光標記使用的熒光分子為7-氨基香豆素-3-碳酸活化酯、7-二乙氨基香豆素-3-碳酸活化酯、7-氨基香豆素-3-碳酸活化酯、7-甲氧基香豆素-3-碳酸活化酯、5/6-熒光素碳酸活化酯、熒光素-5-異硫氰酸酯（FITC）、熒光素-5馬來酰亞胺、5-碘乙酰胺基熒光素、若丹明6G-5/6-碳酸活化酯、磺基羅丹明B磺酰氯、X-羅丹明-6-碳酸活化酯、磺基羅丹明101磺酰氯、四乙氨基羅丹明-5/6-碳酸活化酯、四甲氨基羅丹明-6-馬來酰亞胺、德州紅C2馬來酰亞胺、四甲氨基羅丹明-5/6-異硫氰酸酯、四甲氨基羅丹明-5/6-馬來酰亞胺、丹磺酰氯、EDANS?C2馬來酰亞胺、碘乙酰胺基EDANS、NBD-X活化酯、ThioGlo-1或者CHROMIS?L5H?N?azide。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2）中，a步驟中始端序列與初始合成砌塊連接的方法是：

將始端序列氨基化，初始合成砌塊羧基、巰基或炔基化，反應即得。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2）中，合成過程pH為8~12，溫度為0~30℃。

11.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2）中，始端序列與標記序列、標記序列之間或者標記序列與末端序列的連接方法是：用多核苷激酶使得單鏈DNA的5’-端磷酸化，用RNA連接酶連接，即可。

12.根據權利要求11所述的方法，其特征在于：所述的多核苷激酶為T4多核苷激酶，所述RNA連接酶為T4RNA連接酶。

13.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（3）所述篩選方法是基于受體-配體特異性反應的篩選方法。

14.一種先導化合物的合成及篩選試劑盒，其特征在于：它包括如下成分：

1）i種合成砌塊與（i+2）種單鏈DNA片段，（i+2）種單鏈DNA片段包括i種標記序列、一種始端序列和一種末端序列，i種標記分別序列特異標記i種合成砌塊，其中，i=1，2，3…n；

2）熒光標記用試劑、始端序列與初始合成砌塊連接用試劑、組合化學方法合成用試劑和單鏈DNA片段連接用試劑；

3）化合物篩選用試劑；

4）DNA測序用試劑。