[發(fā)明專利]羧甲基化分子修飾制備高效低聚黃芪多糖的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210554945.9
• 申請(qǐng)日: 2012-12-05
• 公開（公告）號(hào): CN103030704A
• 公開（公告）日: 2013-04-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊小軍;王思宇;姚軍虎;王筱霏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C08B37/00
• 分類號(hào): C08B37/00;C07H1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及生物活性多糖的制備和結(jié)構(gòu)改造技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種羧甲基化分子修飾制備高效低聚黃芪多糖的方法。

背景技術(shù)：

近年來的研究發(fā)現(xiàn)黃芪中含多糖、皂甙、黃酮、氨基酸等多種有效成分，這些活性成分均有促進(jìn)抗體生成和免疫反應(yīng)的作用，其中以對(duì)黃芪多糖的研究報(bào)道為多。黃芪多糖是黃芪的主要活性成分之一，經(jīng)過高科技萃取、分離而得到的。

目前萃取的黃芪多糖其免疫調(diào)控活性和抗氧化力差，浪費(fèi)原材料，且浪費(fèi)時(shí)間。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的是提供一種羧甲基化分子修飾制備高效低聚黃芪多糖的方法，它具有很好的調(diào)控活性和抗氧化力，節(jié)約材料，節(jié)省時(shí)間。

為了解決背景技術(shù)所存在的問題，本發(fā)明是采用如下技術(shù)方案：它的制備方法為：采用氫氧化鈉-一氯乙酸體系法進(jìn)行羧甲基化分子修飾，以產(chǎn)物量、羧甲基替代度和免疫調(diào)控功能為指標(biāo)，以反應(yīng)溫度、試劑配比和反應(yīng)時(shí)間為因素，用正交試驗(yàn)優(yōu)選出黃芪多糖氫氧化鈉-一氯乙酸法修飾的最佳條件為反應(yīng)溫度65℃；氫氧化鈉和一氯乙酸的配比1.6∶1、反應(yīng)時(shí)間3.5h。取黃芪煎液第一次緩慢加入乙醇使終濃度達(dá)50％，去沉淀；上清液再加入乙醇使終濃度達(dá)60％，取沉淀得到粗多糖，黃芪多糖純化后用優(yōu)化的條件修飾，通過飼養(yǎng)試驗(yàn)研究比較，所得黃芪多糖經(jīng)純化和羧甲基化修飾后其促生長(zhǎng)和增強(qiáng)免疫活性最強(qiáng)。

羧甲基化黃芪多糖制備條件為：

稱取上述制備的10g黃芪多糖，加入至100mL異丙醇溶劑中，加入1％氫氧化鈉溶液90mL，攪拌使堿液溶解后，在快速攪拌條件下，通過真空滴液漏斗滴入一氯乙酸的異丙醇溶液(1∶1.2，50mL)，控制溫度在65℃攪拌反應(yīng)3.5小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后將上層異丙醇傾出并回收利用，下層加入5％鹽酸溶液，快速攪拌下加入乙醇50mL，過濾，固體物部分溶解于水中，用乙醇沉淀，過濾，干燥，得白色粉末狀固體，即羧甲基黃芪多糖。

羧甲基化黃芪多糖的理化性質(zhì)測(cè)定：

一、多糖含量測(cè)定：

原黃芪多糖的含量最高為98.46％，羧甲基化黃芪多糖的多糖含量均低于原黃芪多糖，表明羧甲基化修飾對(duì)于多糖含量是有損失的。由羧甲基化多糖得率可知最佳條件為反應(yīng)溫度65℃；氫氧化鈉和一氯乙酸的配比1.6∶1、反應(yīng)時(shí)間3.5h。其取代度為0.82。

本發(fā)明具有很好的調(diào)控活性和抗氧化力，節(jié)約材料，節(jié)省時(shí)間。

附圖說明：

圖1為本發(fā)明中L₉(3⁴)正交示意圖，

圖2為本發(fā)明中羧甲基化修飾對(duì)黃芪多糖含量的影響示意圖，

圖3為本發(fā)明中羧甲基化黃芪多糖紅外光譜示意圖，

圖4為本實(shí)施例中日糧羧甲基化黃芪多糖對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響示意圖，

圖5為本實(shí)施例中日糧羧甲基化黃芪多糖對(duì)肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響示意圖，

圖6為本實(shí)施例中日糧羧甲基化黃芪多糖對(duì)肉仔雞一免和二免后不同階段血清BSA抗體效價(jià)(OD₄₅₀)的影響示意圖，

圖7為本實(shí)施例中日糧羧甲基化黃芪多糖對(duì)肉仔雞血液淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液細(xì)胞因子的影響示意圖，

圖8為本實(shí)施例中日糧羧甲基化黃芪多糖對(duì)肉仔雞外周全血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響示意圖，

圖9為本實(shí)施例中日糧羧甲基化黃芪多糖對(duì)肉仔雞脾臟抗氧化酶及脂質(zhì)過氧化物的影響示意圖。

具體實(shí)施方式：

參看圖1-圖3，本具體實(shí)施方式采用如下技術(shù)方案：它的制備方法為：采用氫氧化鈉-一氯乙酸體系法進(jìn)行羧甲基化分子修飾，以產(chǎn)物量、羧甲基替代度和免疫調(diào)控功能為指標(biāo)，以反應(yīng)溫度、試劑配比和反應(yīng)時(shí)間為因素，用正交試驗(yàn)優(yōu)選出黃芪多糖氫氧化鈉-一氯乙酸法修飾的最佳條件為反應(yīng)溫度95℃、氯磺酸與吡啶的配比1∶6、反應(yīng)1h；取黃芪煎液第一次緩慢加入乙醇使終濃度達(dá)50％，去沉淀；上清液再加入乙醇使終濃度達(dá)60％，取沉淀得到粗多糖，黃芪多糖純化后用優(yōu)化的條件修飾，通過系列抗病毒和增強(qiáng)免疫活性比較，所得黃芪多糖經(jīng)純化和羧甲基化修飾后其抗病毒和增強(qiáng)免疫活性最強(qiáng)。

羧甲基化黃芪多糖制備條件為：

以反應(yīng)溫度A，氫氧化鈉和一氯乙酸摩爾比B和反應(yīng)時(shí)間C為因素，按3因素3水平的正交試驗(yàn)L9(3³)設(shè)計(jì)9種修飾條件(參看圖1)：