[發明專利]異養小球藻的選育方法

無效

• 申請號: 201210554310.9
• 申請日: 2012-12-19
• 公開（公告）號: CN103881914A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 張述智;夏偉;朱紹輝;張浩;王曉麗;徐權汗;李之詳;許團輝
• 申請（專利權）人: 青島中仁藥業有限公司
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

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技術領域

本發明屬于微藻培育技術領域，具體涉及異養小球藻的選育方法。

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背景技術

小球藻細胞內含有豐富的葉綠素，屬于單細胞綠藻，是真核生物。小球藻中富含CGF（小球藻生長因子），能迅速恢復機體造成的損傷，并可作為食品風味改良劑，廣泛應用于食品及發酵領域。小球藻產于淡水或咸水。淡水種常生長在較肥沃的水體中，有時在潮濕土壤、巖石、樹干上也能發現。在自然條件下水體中的個體不多，但在人工培養條件下能大量生長繁殖，產量很高，蛋白質含量為干重的50%左右，還富含其他成分。現有培育小球藻的方法比較復雜，培育時間長，且藻細胞生物含量也不高。

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發明內容

為了克服現有技術領域存在的上述缺陷，本發明的目的在于，提供一種異養小球藻的選育方法，解決現有技術培育小球藻的方法比較復雜，培育時間長，且藻細胞生物含量也不高的問題。

本發明提供的異養小球藻的選育方法，包括以下步驟：

（1）????調節培養液使其pH為7—8，120℃，0.10-0.18Mp高溫滅菌30min；

（2）????取滅菌后的培養液100ml，加入1—2g瓊脂溶解后滅菌，倒入滅過菌的培養皿，冷卻凝固后，制成篩選平板；

（3）????取來自天然水體含有綠水的水樣，經離心機離心后，倒去上清液，用無菌的培養液懸浮沉在離心管底部的細胞，然后再經過離心后，除去上清，經過3-5次重復，最后，將培養液加入離心管，使沿在底部的藻細胞懸浮，吸取藻細胞懸浮液2ml，均勻的涂在篩選平板表面，放在20-35℃的光照條件下培養，培養5-10天后，在平板表面長出綠色的單克隆藻體；

（4）????在無菌條件下，接種單克隆藻體于三角瓶中的無菌異養培養液中，進行無光培養，震蕩轉速為200r/min，溫度為25℃，培養5天。

本發明提供的異養小球藻的選育方法，其有益效果在于，培養過程簡單，培育時間短，藻細胞生物含量較高。

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具體實施方式

下面結合一個實施例，對本發明提供的異養小球藻的選育方法進行詳細的說明。

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實施例

本實施例的異養小球藻的選育方法，包括以下步驟：

（1）????調節培養液使其pH為7—8，120℃，0.10-0.18Mp高溫滅菌30min；

（2）????取滅菌后的培養液100ml，加入1—2g瓊脂溶解后滅菌，倒入滅過菌的培養皿，冷卻凝固后，制成篩選平板；

（3）????取來自天然水體含有綠水的水樣，經離心機離心后，倒去上清液，用無菌的培養液懸浮沉在離心管底部的細胞，然后再經過離心后，除去上清，經過3-5次重復，最后，將培養液加入離心管，使沿在底部的藻細胞懸浮，吸取藻細胞懸浮液2ml，均勻的涂在篩選平板表面，放在20-35℃的光照條件下培養，培養5-10天后，在平板表面長出綠色的單克隆藻體；

（4）????在無菌條件下，接種單克隆藻體于三角瓶中的無菌異養培養液中，進行無光培養，震蕩轉速為200r/min，溫度為25℃，培養5天，藻細胞生物量達到25g/L。