[發(fā)明專利]光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210553898.6
• 申請日: 2012-12-19
• 公開（公告）號: CN103881934A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張述智;夏偉;朱紹輝;張浩;王曉麗;徐權(quán)汗;李之詳;許團輝
• 申請（專利權(quán)）人: 青島中仁藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法。

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背景技術(shù)

光合細(xì)菌(?Photosyntheti?bacteria，PSB)是利用光能和二氧化碳維持自養(yǎng)生活的有色細(xì)菌。是地球上出現(xiàn)最早、自然界中普遍存在、具有原始光能合成體系的原核生物，厭氧條件下進(jìn)行不放氧光合作用，沒有形成芽孢能力，革蘭氏陰性菌，是一類以光作為能源、能在厭氧光照或好氧黑暗條件下利用自然界中的有機物、硫化物、氨等作為供氫體兼碳源進(jìn)行光合作用的微生物。

光合細(xì)菌液態(tài)微生態(tài)的制劑方法通常為采用敞開粗放式的培養(yǎng)方式，這種培養(yǎng)方式會受到自然界中天氣溫度光照等的干擾，且易摻加進(jìn)其他的細(xì)菌，在有些特殊條件下會影響到光合細(xì)菌的主導(dǎo)地位，從而影響光合細(xì)菌產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定性。

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發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)領(lǐng)域存在的上述缺陷，本發(fā)明的目的在于，提供一種光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法，解決現(xiàn)有技術(shù)采用敞開粗放式方法培養(yǎng)光合細(xì)菌液態(tài)微生態(tài)制劑，易受天氣溫度光照的干擾，易摻雜其他細(xì)菌等，影響光合細(xì)菌產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定性的問題。

本發(fā)明提供的光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法，包括以下步驟：

（1）????平板培養(yǎng)基培養(yǎng),?光合細(xì)菌保存菌種劃線接種至平板培養(yǎng)基，121℃滅菌30分鐘，32℃培養(yǎng)24h；

（2）????試管接種，取發(fā)育健壯、菌落典型的菌株接種10ml，121℃滅菌，32℃培養(yǎng)24h；

（3）????三角瓶接種100ml，121℃滅菌，32℃培養(yǎng)24h；

（4）????三角瓶接種1000ml，121℃滅菌，32℃培養(yǎng)24h；

（5）????二級種子的制備，將光合細(xì)菌于30℃，通氣量為0.24m³/h條件下培養(yǎng)24h，得二級菌種9L，檢測菌種的性狀、pH值及活菌量；

（6）????成品的制備，先向500L的液體發(fā)酵灌內(nèi)加入100L飲用水，將稱量好的蛋白胨90g，酵母膏90g，乙酸鈉180g，碳酸氫鈉180g，氯化銨180g，氯化鎂180g，磷酸氫二鉀180g，葡萄糖3.6kg投入到發(fā)酵灌，攪拌10分鐘至全部溶解，然后停止攪拌，加飲用水至180L，定完液位后，開啟攪拌，然后打開蒸汽閥升溫至100℃，排冷空氣，排掉冷空氣后繼續(xù)升溫至121℃保持30分鐘，滅菌結(jié)束，冷卻，備用，當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至30℃，將光合細(xì)菌二級種子9L通過壓差接種的方式，接種到500L發(fā)酵罐中，30℃，通氣量為9.6m³/h條件下發(fā)酵48h，得三級菌種。

所述步驟（1）或（2）或（3）或（4）所用培養(yǎng)基均是由0.5g蛋白胨，0.5g酵母膏，1.0g乙酸鈉，1.0g碳酸氫鈉，1.0g氯化銨，0.5g氯化鎂，1.0g磷酸氫二鉀，15g瓊脂，1000ml蒸餾水配置而成。

本發(fā)明提供的光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法，其有益效果在于，本發(fā)明中培養(yǎng)基pH值不隨著培養(yǎng)時間的延長而升高，始終保持在5.5-7.5之間，不會抑制光合細(xì)菌的生長；采用低濃度的有機培養(yǎng)基諸如蛋白胨、酵母膏及氮磷鉀鹽保證了培養(yǎng)出的光合細(xì)菌顏色純正，亮麗，不會變淡、變綠、變黑等；采用低濃度的氮源和碳源保證了低成本，更能適于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)；本發(fā)明培養(yǎng)的光合細(xì)菌生長速度快，菌液濃度高；工藝簡單并易于控制，不易染雜菌，菌株濃度高，加工成本低，生產(chǎn)環(huán)境友好。

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具體實施方式

下面結(jié)合一個實施例，對本發(fā)明提供的光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法進(jìn)行詳細(xì)的說明。

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實施例

本實施例的光合細(xì)菌液微生態(tài)制劑制備方法，包括以下方法：

（1）????平板培養(yǎng)基培養(yǎng),?光合細(xì)菌保存菌種劃線接種至平板培養(yǎng)基，121℃滅菌30分鐘，32℃培養(yǎng)24h；

（2）????試管接種，取發(fā)育健壯、菌落典型的菌株接種10ml，121℃滅菌，32℃培養(yǎng)24h；

（3）????三角瓶接種100ml，121℃滅菌，32℃培養(yǎng)24h；

（4）????三角瓶接種1000ml，121℃滅菌，32℃培養(yǎng)24h；

（5）????二級種子的制備，將光合細(xì)菌于30℃，通氣量為0.24m³/h條件下培養(yǎng)24h，得二級菌種9L，檢測菌種的性狀、pH值及活菌量；

（6）????成品的制備，先向500L的液體發(fā)酵灌內(nèi)加入100L飲用水，將稱量好的蛋白胨90g，酵母膏90g，乙酸鈉180g，碳酸氫鈉180g，氯化銨180g，氯化鎂180g，磷酸氫二鉀180g，葡萄糖3.6kg投入到發(fā)酵灌，攪拌10分鐘至全部溶解，然后停止攪拌，加飲用水至180L，定完液位后，開啟攪拌，然后打開蒸汽閥升溫至100℃，排冷空氣，排掉冷空氣后繼續(xù)升溫至121℃保持30分鐘，滅菌結(jié)束，冷卻，備用，當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至30℃，將光合細(xì)菌二級種子9L通過壓差接種的方式，接種到500L發(fā)酵罐中，30℃，通氣量為9.6m³/h條件下發(fā)酵48h，得三級菌種約200L，總含菌量達(dá)到1.3×10⁹cfu/mL。