[發明專利]一種抗菌蛋白HAS1編碼基因的克隆、表達及其應用

有效

• 申請號: 201210553669.4
• 申請日: 2012-12-19
• 公開（公告）號: CN103031309A
• 公開（公告）日: 2013-04-10
• 發明（設計）人: 熊國如;伍蘇然;趙更峰;馮翠蓮;張樹珍
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12N15/70;C07K14/32;A01N47/44;A01P3/00;A01H5/00
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 劉建芳;楊海霞

技術領域

本發明涉及微生物產生的對植物病原菌存在抑菌活性的新抗菌蛋白，更具體地說，涉及一種來源于微生物的新抗菌蛋白的鑒定和應用。本發明是建立在生防菌株HAS對甘蔗黑穗病菌具有很好抑制作用的基礎之上。

背景技術

甘蔗黑穗病是由Ustilago?scitaminea?Sydow.?引起的一種真菌病害，屬擔子菌綱黑粉菌屬。該病害最早是在1877年南非納塔爾發現，隨后在東半球的亞洲和非洲的大部分國家均有報道。1940年在美洲阿根廷發生，隨后西半球也發生該病害。20世紀70-90年代，夏威夷、弗羅里達、摩洛哥、澳大利亞等國家、地區也相繼有該病害發生的報道。中國于1932年在廣州發現該病害，之后各地也都出現該病。特別是近年來，隨著蔗種無性繁殖栽培技術的推廣，蔗種頻繁引進調運，蔗田長期連作同一品種以及宿根蔗年限的逐漸延長，造成甘蔗黑穗病在我國廣西、云南、廣東、福建、海南等省蔗區發生日趨嚴重，造成的損失多達10-30%，嚴重的宿根蔗幾乎絕收。

甘蔗黑穗病危害嚴重，但對其的防治效果不理想。生物防治因對環境友好和易于使用而在其它作物病害上已部分地發揮作用，但用于甘蔗黑穗病病害的防治一直停滯不前。國內外也有利用微生物對甘蔗黑穗病菌孢子進行作用的報道。國外，Sinha和Singh報道四種真菌（Fusarium?moniliforme?[Gibberella?fujikuroi]?var.?subglutinans,?Aspergillus?niger,?A.flavus?and?Penicilliumsp.）對甘蔗黑穗病的黑鞭的產生和對冬孢子萌發的抑制作用。國內，廣西大學廖詠梅等采集甘蔗苗期、生長期的甘蔗土壤、健株及病株的種蔗、葉、莖、芽、根和土壤中分離篩選到一些對黑穗病菌有抑制作用的菌株，并利用相關基因序列設計特異性引物，探討得到相關抑制因子的基因。但未見用生物防治措施有效控制黑穗病的系統報道。迄今為止，尚未見到利用微生物及其生防制劑成功用于防治甘蔗黑穗病的相關報導。

發明內容

本發明目的在于提供一種抗菌蛋白編碼基因HAS1基因序列及其在防治甘蔗黑穗病方面的應用。

為實現上述目的，本發明采取如下技術方案：

一種抗菌蛋白編碼基因HAS1基因序列，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.?1所示，具體如下：

長度：750bp

類型：核酸

鏈型：雙鏈

形態：線性

分子類型：基因組DNA

序列描述：

ATGGCGAAACCACTATCAAAGGGGGGAATTTTGATGAAAAAAGTATTGATTGCAGGTGCAGTAGGAACAGCAGTTCTTTTCGGAACCCTTTCATCAGGTATACCAGGCTTACCAGCGGCAGACGCTCAAGTCGCAAAAGCAGCATCCCAGCTGCCTAACGGAATCGGCGGCCGTGCCTACCTGAACAGTACGGGCGCCGTTTTTACAGCTAAAATCACGCTTCCTGAAACTGTCAAAAATAACGACTCGGTCTCTACTCCCTATATTTATTCAGGCTTTAGGGCATCAAGCGGAACTGAAGCCGATATCGGGCTTCAGTACAGCAAACAATACAACGTCTGGAAGCCCCTCATGAAGGTTGGGTCCAAAAATGAAGAAACGTACATCGAAGGAAAAGATAAATTCACATACAATAAAGGCTTCCGCCCTGGAAGCACAGTCCAAATGACAATCTATAAAAATTTAAGCGGCAATACGCGCATGACCCTTTGGGGAACGAACAATGACGGCTACACCGGAAGGATTATCACAGAAATTCAAGGAACCAACATCGGCACGATTTCAAAATGGAAAACCCTTGCTACCGCGGCTGTTTCGTATGAAAGCCAGCGTGATGCGATCAAAGCAACCTTTTCGACATCTTTTAACAACATCACAATCGACAATAAAGCCGTCACTCCTGTGGTAGATACACAGGATTTCGCAAAGGTTTCAGTTGCAGGAAATAACGTTACGATCTCTGTTAATAAA。

所述的抗菌蛋白編碼基因HAS1基因序列，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示，具體如下：

長度：250