[發(fā)明專利]檢測鈉/鉀離子比的方法和試劑盒以及系統(tǒng)

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210553125.8
• 申請日: 2012-12-18
• 公開（公告）號: CN103063629A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發(fā)明（設計）人: 孫紅霞;唐亞林;向俊鋒;楊千帆;管愛嬌;劉巖
• 申請（專利權）人: 中國科學院化學研究所
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C12N15/11;C09B23/06
• 代理公司: 北京弘權知識產權代理事務所(普通合伙) 11363
• 代理人: 郭放;王磊

1.一種檢測液體樣品中鈉/鉀離子比的方法，所述方法包括以下步驟：

（1）用pH6.2～8.2的緩沖溶液和可溶性鈉鹽和鉀鹽配制鈉/鉀離子比不同的多個溶液樣本，其中每個所述溶液樣本中含有相同濃度的菁染料及在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體結構的DNA分子；

（2）將所述多個溶液樣本置于熒光光譜儀下，采用540nm至570nm的激發(fā)波長，檢測采集波長處的熒光強度值；

（3）以各個所述溶液樣本的鈉/鉀比作為橫坐標或縱坐標，以步驟（2）中測得的采集波長處的熒光強度值為縱坐標或橫坐標作圖，從而獲得鈉鉀離子比的標準曲線；

（4）在待測液體樣品中加入所述的DNA分子，并調節(jié)pH值，以使待測液體樣品中的菁染料和DNA分子的濃度以及pH值與步驟（1）中的溶液樣本一致，從而得到測試溶液；

（5）將步驟（4）中獲得的測試溶液置于熒光光譜儀下，采用與步驟（2）中相同的激發(fā)波長，檢測波長在所述采集波長處的熒光強度值；

（6）利用步驟（5）中測得的中測得的熒光強度值在步驟（3）中獲得的鈉/鉀離子比標準曲線中找到對應的測試溶液的鈉/鉀比值；

其中所述采集波長在570nm至700nm的范圍內。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述在鈉、鉀離子存在下能夠分別形成不同G-四鏈體的DNA分子為分子序列中含有下式I的結構的DNA分子：

GGYGGZGGMGG

式I

其中：Y、Z和M獨立地代表一個或多個任意堿基，G代表鳥嘌呤堿基。

3.如權利要求1或2所述的方法，其中所述G-四鏈體DNA的序列選自以下序列：TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG、TTGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGA、TGAGGGTGGGGAGGGTGGGGAA、AGGGAGGGCGCTGGGAGGAGGG、GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG、GGTTGGTGTGGTTGG、TTGGGGTTGGGGTTGGGGTTGGGG、GGGCGCGGGAGGAAGGGGGCGGG或GGGCGCGGGAGGAATTGGGCGGG。

4.如權利要求1或2所述的方法，其中所述菁染料為式II的化合物，

式II

其中：R₁為C₁-C₆的烷基、苯基、烷基取代的苯基；R₂、R₃、R₄和R₅獨立地選自H或C₁-C₆的烷基，或者R₂和R₃與它們所連接的碳原子一起形成5元至7元的環(huán)結構，或者R₄和R₅與它們所連接的碳原子一起形成5元至7元的環(huán)結構；R₆和R₇為C₁-C₆烷基或者磺酸基取代的C₁-C₆烷基；Y為反離子，根據(jù)R₆和R₇所帶電荷的不同而不同，若R₆和R₇為烷基，則Y為鹵素陰離子；若R₆和R₇只有一個帶有磺酸根，則無需Y作為反離子；若R₆和R₇均帶有磺酸根，則Y為三乙胺陽離子；X₁，X₂獨立地選自C、O、S、Se或Te。

5.如權利要求4所述的方法，其中所述C₁-C₆的烷基選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、正己基或異己基。

6.如權利要求4所述的方法，其中R₁選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、正己基、異己基、苯基、甲基苯基或二甲基苯基；R₂、R₃、R₄和R₅獨立地選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、正己基或異己基。