[發(fā)明專利]鰻魚中四環(huán)素類藥物殘留檢測的前處理方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210552028.7
• 申請日: 2012-12-19
• 公開（公告）號: CN102998159A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發(fā)明（設計）人: 邱彬;周平;林振宇;郭隆華;陳國南
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N30/06
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發(fā)明屬于分析化學領域，更具體涉及鰻魚中四環(huán)素類藥物殘留檢測的前處理方法。

背景技術

四環(huán)素類藥物為并四苯衍生物，具有十二氫化并四苯基本結構，該類藥物有共同的四個環(huán)的母核，其中尤以土霉素、四環(huán)素、金霉素的抗菌譜最廣，對

革蘭氏陽性菌、陰性菌均具有較強的抗菌作用。四環(huán)素類藥物可在動物體內殘留，并隨魚類、乳制品、蛋等食品進入人體，危害人體健康，具體表現(xiàn)為對人的肺、胃腸、腎臟、皮膚和骨骼造成損害，尤其是對兒童的牙齒損害最大。

四環(huán)素類(TCs)藥物作為一種可治療動物疾病的藥物或飼料添加劑被廣泛使用,用于防治腸道感染和促進生長,容易誘導耐藥菌株和導致食品殘留。研究發(fā)現(xiàn)該類藥物具有致突變性和潛在的致癌性,被許多國家列為限量藥物。為此,世界各國針對進出口動物組織及相關產品中四環(huán)素類殘留量作出了明確的最高殘留限量規(guī)定,以保障公眾健康。

近年來，日本、澳大利亞等對畜、禽肉中抗生素殘留問題進行了大量研

究，日本厚生省要求進口畜禽肉中四環(huán)素族殘留量不得超過0.05mg/kg。澳大利亞規(guī)定四環(huán)素類總量不得大于0.3mg/kg。歐盟一律標準為0.01mg/kg。我國早在1991年就出臺國標對蜂蜜中四環(huán)素類的最高殘留量進行規(guī)定：不得大于0.05mg/kg，也針對它們在畜禽肉及水產品中的最高允許殘留量進行規(guī)定。

鑒于上述原因，有必要研究掌握四環(huán)素類藥物殘留檢測的有效檢測方法，達到有效監(jiān)控其在環(huán)境中殘留，減少對于人類危害的目的。現(xiàn)階段對于四環(huán)素類藥物殘留的檢測方法多樣，但都包含了樣品前處理過程。前處理方法多為使用提取劑多次提取或有機溶劑萃取，之后使用層析柱或者具有吸附性填料的柱子進行清洗。此類前處理技術的關鍵缺點是提取過程繁瑣、處理過程耗時較長。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種操作簡單有效的鰻魚中四環(huán)素類藥物殘留檢測的前處理方法。

????本發(fā)明的一種鰻魚中四環(huán)素類藥物殘留檢測的前處理方法,?包括以下步驟：

(1)?稱取樣品5.00?g，精確至0.01?g，置于50mL離心管中；

(2)?加入檸檬酸緩沖溶液20mL，混勻，10000轉/分鐘離心10分鐘；

(3)?準確吸取上清液10?mL于離心管中，備用；

(4)?C₁₈固相萃取柱的活化過程如下：????????????

????????????????????a.5mL甲醇淋洗，?

????????????????????b.5mL檸檬酸緩沖溶液除雜，

c.5mL蒸餾水平衡；?

(5)?將步驟（3）中的上清液過柱，先用2mL檸檬酸緩沖溶液淋洗，棄去全部淋洗液；

(6)?再用0.8ml甲醇，以1-3mL/min的流速洗脫，收集洗脫液；

(1)?往洗脫液中加入0.1mol/mL乙酸銨緩沖溶液定容至1mL，然后用0.22mm微孔濾膜過濾，所得濾液即可上機檢測；

????上述檸檬酸緩沖溶液的PH?=?3.5±0.05。

????所述檸檬酸緩沖溶液的配制為：稱取4.20g檸檬酸，用蒸餾水溶解，定容至200mL；稱取2.84g磷酸氫二鈉，用蒸餾水溶解，定容至100mL；取160mL檸檬酸溶液與100mL磷酸氫二鈉溶液混合，用鹽酸調節(jié)PH?=?3.5±0.05制備緩沖溶液，稱取9.68g乙二胺四乙酸二鈉放入上述緩沖溶液中，使其溶解，搖勻。

????所述乙酸銨緩沖溶液的配制為：稱取0.385g乙酸銨，加入1mL甲酸溶液，用蒸餾水溶解，定容至500mL。

????所述四環(huán)素類藥物包括土霉素、四環(huán)素、金霉素、強力霉素。

本發(fā)明的前處理方法與現(xiàn)有方法相比，具有操作簡單有效、成本低、重現(xiàn)性好等優(yōu)點，具有很強的可操作性,經該方法處理后的待測樣品能夠直接用液相色譜-串聯(lián)質譜法進行檢測。

本發(fā)明的顯著優(yōu)點為:

1)?目前報導的大部分四環(huán)素類藥物提取方法是針對動物源性食品中設計，而本方法是針對鰻魚中四環(huán)素類藥物殘留檢測的一種提取方法；

2)?目前報導的大部分提取劑均為EDTA-Mcllvainc緩沖溶液，而本方法采用EDTA-Mcllvainc緩沖溶液的特定PH值，使四環(huán)素類藥物殘留能夠得到充分的提取，從而能夠有效的檢測四環(huán)素類藥物殘留；