[發明專利]重組蛋白

無效

• 申請號: 201210551666.7
• 申請日: 2012-12-18
• 公開（公告）號: CN103864913A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 彭文君;楊淑萍;彭宏智;陳郁鴻
• 申請（專利權）人: 聯亞生技開發股份有限公司
• 主分類號: C07K14/505
• 分類號: C07K14/505;C12N15/12;C12N5/10;A61K38/18;A61P7/06
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 張瑩

【發明所屬的技術領域】

本發明涉及一種重組蛋白，且特別涉及一種具有較長半衰期的高糖基化紅細胞生成素。

【背景技術】

紅細胞生成素(Erythropoietin，簡稱EPO)是一種糖蛋白質激素，骨髓中血紅細胞前驅的細胞因子。在人體中，可進行紅細胞的制造、荷爾蒙的調節。同時，它也具有其他的生物功能，例如，當神經受到傷害時，紅細胞生成激素也參與傷口愈合過程。

紅細胞生成作用是指紅細胞的生成，其作用為彌補被破壞的細胞。紅細胞生成是一種受控制的生理機制，使足夠的紅細胞可被運用于適當的組織氧合作用。人類紅細胞紅細胞生成素(hEPO)由腎所產生，為一種體液血漿因子，可刺激紅細胞的生成(Carnot，P??and?Deflandre，C??(1906)C.R.Acad.Sci.143：432；Erslev，AJ(1953B?1ood?8：349；Reissmann，RR(1950)Blood?5：372；Jacobson，LO，Goldwasser，E，Freid，W?and?Plzak，LF(1957)Nature179：6331-4)。自然生成的EPO可刺激骨髓中紅細胞前驅細胞的分裂及分化，并經由與紅細胞前軀物受體的結合而展現其生物活性(Krantz，BS(1991)Blood?77：419)。

利用重組體DNA技術已可合成紅細胞生成素(Egrie，JC，Strickland，TW，Lane，J?et?al.(1986)Immunobiol.72：213-224)，將經選殖的人類EPO基因嵌入，并以中國倉鼠卵巢組織細胞表達。EPO多肽在無糖情形下的分子量是18,236Pa。在完整的EPO分子中，分子量中約有40％為碳水化合物基團，其在蛋白質糖基化作用位置上將蛋白質糖基化(Sasaki，H，Bothner，B，Dell，A?andFukuda，M(1987)J.Biol.Chem.262：12059)。

因紅細胞生成素是形成紅細胞所必要的，所以EPO可用來治療紅細胞低下或缺失的血液失調癥。就臨床而言，EPO可用于治療慢性腎衰竭病人(CRF)(Eschbach，JW，Egri，JC，Downing，MR?et?al.(1987)NEJM?316：73-78；Eschbach，JW，Abdulhadi，MH，Browne，JK?et?al.(1989)Ann.Intern.Med.111：992；Egrie，JC，Eschbach，JW，McGuire，T，Adamson，JW(1988)Kidney?Intl.33：262；Lim，VS，Degowin?RL，Zavala，D?et?al.(1989)Ann.Intern.Med.110：108-114)、AIDS及接受化療的癌癥病人的貧血(Danna，RP，Rudnick，SA，Abels，RI?In：MB，Garnick，ed.Erythropoietin?in?Clinical?Applications-An?International?Perspective.New?York，NY：Marcel?Dekker；1990：p.301-324)。然而，目前EPO蛋白質治療的生物利用率，受限于不良的血漿半衰期，以及蛋白酶的降解作用，使其難以獲得良好的臨床效力。

【發明內容】

本發明的目的為提供一種具有較長半衰期的高糖基化紅細胞生成素。

為達上述目的，本發明另提供一種重組蛋白，包括：紅細胞生成素；高糖基化片段；人類絨毛膜促性腺激素的羧基末端肽，以及促血小板生成素的羧基末端肽。

本發明更提供一種核苷酸序列，其編碼上述重組蛋白。

本發明更提供一種細胞，其轉染上述核苷酸序列以表達上述重組蛋白。

本發明更提供一種組合物，包括上述重組蛋白，以及藥學上可接受的載體或佐劑。

為了讓本發明的上述和其他目的、特征、和優點能更明顯易懂，下文特舉較佳實施例，并配合所附圖示，作詳細說明如下：

【具體實施方式】

本發明提供一種長效型紅細胞生成素，及其制備與使用方法。

在一個實施方案中，本發明提供一種重組蛋白，其包括一紅細胞生成素以及一高糖基化片段。

本發明所述的“紅細胞生成素(EPO)”包括任何來源的EPO蛋白，特別是指人類或動物EPO。本發明的EPO不限于自然的EPO蛋白，也包括其衍生物、相似物、修飾物、突變物等，只要其具有自然EPO蛋白的活性即可。