[發(fā)明專(zhuān)利]一種超低分肝素鈉工藝研究

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210551440.7
• 申請(qǐng)日: 2012-12-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103145878A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉乃山;遲培升;夏襯來(lái);陸玉梅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 青島九龍生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C08B37/10
• 分類(lèi)號(hào): C08B37/10
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)涉及從低效價(jià)肝素鈉中將蛋白去除，得到超低分子肝素鈉。?

背景技術(shù)

肝素鈉是從豬小腸粘膜中提取的一種生化藥品，是手術(shù)中不可替代的、挽救生命的、市場(chǎng)不能斷檔的首選藥物。自二十世紀(jì)四十年代用于臨床以來(lái)，其應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大，尤其是二十世紀(jì)九十年代以來(lái)，該產(chǎn)品臨床主要用于防止血栓形成，治療心血管病、血液病、尿毒癥等。西方國(guó)家已開(kāi)始研究肝素鈉對(duì)癌癥的防治作用，其新用途不斷增加，而超低分子肝素鈉是治療血栓的主要藥物，目前世界上還未上市，我公司進(jìn)行了工藝攻關(guān)，已成功解決了治療的目的，并在臨床成功治療了上百例。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種超低分子肝素鈉工藝研究的方法，是為了攻克國(guó)內(nèi)外治療血栓的疑難雜癥，通過(guò)產(chǎn)品的逐級(jí)沉淀分離雜質(zhì)而得到的。?

在發(fā)明的技術(shù)方案中，包括如下步驟：?

一、提取?

1、粗品溶解：?

開(kāi)啟水閥，加入一定量飲用水，再將肝素鈉粗品(效價(jià)在10-20usp/mg)加入到反應(yīng)罐中，邊攪邊加，按原料與飲用水1∶(6-7)比例溶解，攪拌5-10小時(shí)至全部溶解；?

2、酶解：?

將上一步溶解液，先用鹽酸溶液調(diào)PH7.0-8.0，升溫至50-55℃之間時(shí)加入胃蛋白酶5-10g/億單位，再加入50g/億單位胰酶，50-55℃保溫4小時(shí)；?

3、急升溫：?

將上一步酶解液在1小時(shí)內(nèi)升溫至85-90℃，靜止10-30分鐘，開(kāi)攪拌，通入循環(huán)水降溫，待溫度降至50-55℃時(shí)，用2-6mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)PH10.0-12.0，靜止分層20-30小時(shí)；?

4、底部沉淀的雜質(zhì)離心：?

虹吸上清，用40-100目濾袋過(guò)濾，過(guò)濾后的溶液分為上清液和下層沉淀，留上清液待沉淀，下層沉淀放離心機(jī)離心，離心后留上層離心液；?

二、精制?

1、第一次沉淀：?

待上述上清液和離心液溫度降至20-30℃，加入20-30g/L氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸將濾液調(diào)PH10.0-12.0，邊攪邊加濃度為95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20℃時(shí)達(dá)到50％，沉淀15小時(shí)；?

2、第一次氧化：棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，然后加入體積10％雙氧水，氧化15小時(shí)；?

3、第二次沉淀：溶液加入20-30g/L氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸溶液調(diào)將溶液PH6.0-7.0，邊攪邊加濃度為95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20℃時(shí)達(dá)到50％，沉淀15小時(shí)；?

4、第二次氧化：棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，然后加入體積10％雙氧水，氧化15小時(shí)；?

5、第三次沉淀：溶液加入20-30g/L氯化鈉，用鹽酸溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，邊攪邊加濃度為95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20℃時(shí)達(dá)到45～50％，沉淀15小時(shí)；?

6、第三次氧化：棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，然后加入體積10％雙氧水，氧化15小時(shí)；?

7、第四次沉淀：溶液加入20-30g/L氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸溶液調(diào)將溶液PH6.0-7.0，邊攪邊加濃度為95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在?20℃時(shí)達(dá)到50％，沉淀15小時(shí)；?

8、第四次氧化：棄去上層乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，然后加入體積10雙氧水，氧化15小時(shí)；?

9、溶液加入20-30g/L氯化鈉，用鹽酸溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，邊攪邊加濃度為95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20℃時(shí)達(dá)到50％，沉淀15小時(shí)；?

10、將沉淀物用純化水按2-5L/億單位溶解后，用孔徑0.22-0.3微米濾膜板框機(jī)微濾，用乙醇沉淀，使乙醇濃度達(dá)75-80％，再加入23-26％的氯化鈉溶液，每1升溶液加6-10ml氯化鈉溶液，靜止沉淀10-12小時(shí)；?

11、將上層乙醇棄去，加入無(wú)水乙醇脫水，邊攪邊加，使乙醇濃度為97-99％，靜止24-30小時(shí)，棄去上層乙醇，將不銹鋼砂芯棒放在產(chǎn)品中，用真空泵通過(guò)管道和過(guò)濾瓶把剩余乙醇抽干，待干燥；?