[發明專利]抗H9亞型流感病毒血凝素蛋白的單克隆抗體及其應用

無效

• 申請號: 201210550329.6
• 申請日: 2012-12-17
• 公開（公告）號: CN103059132A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 周紅波;金梅林;陳煥春;程艷青;但漢并;郭學波;張艷;黃慧敏;劉小坤
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 樊戎;徐紹新

技術領域

本發明屬于動物病毒與動物傳染病學檢測技術領域，具體地說，本發明涉及抗H9亞型流感病毒血凝素蛋白的單克隆抗體，本發明還涉及抗H9亞型流感病毒血凝素蛋白的單克隆抗體在在制備H9亞型流感病毒雙抗體夾心酶聯免疫檢測試劑盒中的應用及雙抗體夾心酶聯免疫檢測試劑盒和檢測方法。?

背景技術

1975年，Kohler?G和Milstein?C在Nature雜志上發表了細胞融合法建立雜交瘤技術，創建了具有劃時代意義的雜交瘤單克隆抗體技術。經克隆后產生結構和各種特性完全相同的高純度抗體，稱為單克隆抗體（Monoclonal?Antibody，McAb），簡稱單抗。單克隆抗體技術的發現和使用，對現代生命科學研究的發展起到了巨大的推動作用，已經成為生物技術領域的一個重要方面。迄今，該技術的應用已經廣泛應用于基礎研究、疾病診斷、治療、預防等方面。?

禽流感(?Avian?influenza,?AI)是由?A?型流感病毒(?Avian?influenza?virus,?AIV)?引起的病毒性烈性傳染病,是目前危害世界及我國養禽業最重要的疫病之一。H9亞型禽流感病毒最早由Hommee?and?Easterday(1970)從火雞體內分離到。1994年，陳伯倫等(陳伯倫等，1994)從病蛋雞體內分離到H9亞型AIV。此后，H9亞型AIV在我國廣泛存在，多呈低致病性感染，并呈逐漸蔓延之勢。至?1997?年,?H9?亞型?AIV?廣泛分布于各大洲。韓國、?愛爾蘭、?意大利等國都有H9?禽流感暴發的報道,?說明其已在家禽中建立了穩定的種系。1998年從香港的家豬體內分離到2株H9亞型流感病毒，這是首次從哺乳動物體內分離到H9亞型流感病毒。1999從香港患流感的女孩體內分離到兩株H9流感病毒，對這兩株病毒的分析表明其所有的基因片段與AIV—A／Quail／Hong?Kong／G1／97(H9)高度同源，是典型的禽源流感病毒，該毒株是香港人感染H5N1和H9亞型密切相關的分支代表株。2000-2001年，對中國南方地區的水禽(主要是家鴨)?進行流感病毒監測發現約10%水禽被H9?感染，感染率是20?世紀70?年代的4?倍。同樣對這些?H9?毒株的基因片段進行克隆和測序分析,?結果證明,?對于?HA?和?NA?基因片段大多數與DK/?Y280/?97?亞群毒株關系密切從而證明這些毒株HA?和NA?基因片段的陸禽起源。而其6?個內部基因片段遺傳演化上則證實來自水禽并且這6?個內部基因片?段與2001?年香港暴發的H5N1?病毒內部基因片段關系緊密。據報道，A/?Quail/?Hong?Kong?/?G1/?97?株很可能參與了H9?亞型之間的基因重排從而產生了可感染人類的新型毒株。在豬體內也曾分離出了類人型的和類禽亞型的毒株,?二者很有可能在豬體內發生基因重排,?從而產生更加適應人源和禽源的毒株從而能突破種間屏障感染人。盡管還沒有充分的證據表明?H9?亞型流感病毒能在人與人之間傳播但其已經成為目前嚴重危害人類健康的重要傳染病之一。?

藏雞是世界上獨一無二的寶貴遺傳資源,?近年來,隨著西藏農牧業產業結構的調整,藏雞場集約化程度不斷提高,?藏雞養殖已經成為西藏地區農牧民增收致富的重要途徑之一。但由于缺乏全面、?系統的雞病防治技術,致使雞的各種傳染性疾病發病率很高,尤其是全球流感暴發和流行,?給藏雞養殖業帶來很大的經濟損失,?嚴重挫傷了農牧民養殖的積極性。西藏地處我國西南邊疆,?邊境線漫長,與多個國家接壤,處在鳥類遷徙路線上,是我國野生鳥類重要聚集地之一,?其中有的國家的野鳥中已經檢測到?AIV,這對西藏地區養禽業帶來了嚴重的威脅。因此,?對藏雞、?鴨等禽類進行H9亞型AIV?分子流行病學調查及生物特性研究為AIV?的預測預警提供理論依據是非常必要的。?