[發明專利]一種用于檢測鯽魚腸道消化吸收率的基因分析方法

有效

• 申請號: 201210550014.1
• 申請日: 2012-12-18
• 公開（公告）號: CN102952890A
• 公開（公告）日: 2013-03-06
• 發明（設計）人: 劉臻;魯雙慶;周毅;孫浪
• 申請（專利權）人: 長沙學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京知本村知識產權代理事務所 11039
• 代理人: 劉江良

1.一種用于檢測鯽魚腸道消化吸收率的基因分析方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）取待檢測的鯽魚，解剖并分離出腸道，將腸道投入保存液中，以用于基因表達的分析；

（2）提取第（1）步中的腸道總RNA；

（3）反轉錄合成cDNA；

（4）以第（3）步中的cDNA為模板，用CDX2引物進行PCR克隆，其中，CDX2引物的上游核苷酸序列如SEQ?ID?No.3所示，下游核苷酸序列如SEQ?ID?No.4所示；

（5）實時熒光定量PCR檢測，其中，目的基因引物為所述的CDX2引物，熒光定量內參基因引物為管家基因β-Actin引物，該引物的上游核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示，下游核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示；

（6）定量PCR結束后，從擴增曲線得出Ct值，計算CDX2基因的表達量，CDX2基因的表達量=2^-ΔΔCt，其中ΔΔCt=(Ct目的基因-Ct管家基因)-?ΔCt校準樣，根據CDX2基因的表達量來判斷鯽魚消化吸收率的高低，即CDX2基因的表達量高，鯽魚的消化吸收率高，相反，CDX2基因的表達量低，鯽魚的消化吸收率低。

2.根據權利要求1所述的基因分析方法，其特征在于：第（4）步cDNA片段克隆的PCR反應體系：2×PCR?Taq?Mix?12.5?μL，上、下游引物各1?μL，cDNA?1?μL，ddH₂O加至25?μL；PCR反應流程：94?℃預變性3?min，95℃變性30?s，55℃退火20?s，72℃延伸20?s，35個循環，72?℃延伸10?min，4℃10?min。

3.根據權利要求1所述的基因分析方法，其特征在于：第（5）步實時熒光定量PCR檢測，?按照SYBR?Green?I?染料法要求，二步法進行定量PCR，反應體系：Takara?SYBR?Premix?Ex?Taq?12.5?μL、濃度10?μM的上下游引物各0.5?μL、cDNA?2?μL、ddH₂O加至25?μL，反應程序：95?℃?30?s，95?℃?3?s、55?℃?25?s、72?℃?11?s?共40個循環，95?℃1?min、55?℃?30?s、95?℃?30?s?終止，4?℃保存。