[發明專利]一種促甲狀腺激素的納米磁微粒化學發光測定試劑盒及其制備方法和檢測方法

有效

• 申請號: 201210549842.3
• 申請日: 2012-12-18
• 公開（公告）號: CN103048474A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發明（設計）人: 于大為;程曉蕾;趙文姬
• 申請（專利權）人: 蘇州浩歐博生物醫藥有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N21/76;G01N33/532
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 孫仿衛;汪青

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種結合了免疫磁微粒分離技術和化學發光免疫分析技術的促甲狀腺激素（TSH）的納米磁微粒化學發光測定試劑盒及其制備方法和檢測方法。

背景技術

促甲狀腺激素(thyroid?stimulating?hormone，TSH)是腺垂體分泌的一種糖蛋白，分子量約28000。它由α和β兩個亞單位組成。TSH的α亞單位與由垂體分泌的促黃體生成激素(luteinizing?hormone，LH)和促卵泡激素(follicle-stimulating?hormone，FSH)，以及由胎盤產生的人絨毛膜促性腺激素(human?chorionic?gonadotropin，HCG)基本相同。它們的差別主要是在β亞單位的氨基酸序列上，使得這些激素有著各不相同的生物學特性，并可以用免疫分析方法把它們區別開來。

TSH的作用靶器官是甲狀腺。TSH的主要功能有幾個方面：1.促進甲狀腺生長；2.促進甲狀腺的碘吸收、甲狀腺過氧化物酶激活和增加合成甲狀腺素的輔酶；3.促進甲狀腺膠質(主要為甲狀腺球蛋白)的合成和水解，分泌甲狀腺激素，包括甲狀腺素(T4)和三碘甲腺原氨酸(T3)；4.促進甲狀腺濾泡的增長擴散。

TSH的合成和釋放主要受到以下幾方面的調控：1.下丘腦——垂體調節系統，促甲狀腺激素釋放激素(TRH)促進TSH的分泌；2.一方面TSH可促進甲狀腺激素的合成，另一方面甲狀腺激素又通過負反饋機制調節TSH的分泌；3.TSH受晝夜節律的影響。正常情況下這些激素相互作用保持一種動態平衡，維持正常生理狀態。TSH的半衰期為54分鐘，每天分泌約165μIU，在肝臟和腎臟代謝清除。

臨床檢測TSH主要用于診斷甲狀腺功能紊亂的各種疾病。由甲狀腺本身病變引起的為原發性甲狀腺功能紊亂，在負反饋機制的作用下TSH水平呈現與T3、T4相反的變化趨勢，如原發性甲亢T3、T4升高而TSH低于正常水平。繼發性甲狀腺功能紊亂則因TSH過度刺激或含量過低引起T3、T4出現相同趨勢的變化，如垂體性甲減表現為TSH與T3、T4均低于正常水平，此時常要進一步做TRH激發試驗以確診病情。檢測TSH也常用于評價口服甲狀腺素替代治療的療效，TSH較低說明用量過大，高于正常則說明用量不足。另外許多臨床用藥也會影響體內TSH的水平，臨床評價檢測結果時應予注意，例如糖皮質激素、多巴胺、一些安眠劑和生長抑素會抑制TSH分泌，使檢測結果偏低；而組胺抑制劑、碘制劑和鋰劑會促進TSH的分泌，使檢測結果偏高。在優生優育方面，也常常要檢測TSH，如懷孕婦女和嬰幼兒，監測生長發育情況是否正常。

目前用于檢測促甲狀腺激素的免疫分析方法主要有酶聯免疫分析法、化學發光免疫分析法等。酶聯免疫分析法存在靈敏度低，線性范圍窄、不易實現全自動化等方法學限制因素。化學發光免疫分析法是在酶聯免疫分析法基礎上發展起來的一種免疫檢測技術，具有靈敏度高、檢測線性范圍寬、操作簡便，自動化程度高等優勢。目前化學發光免疫分析技術因其具有上述諸多優點得到了廣泛的應用。

然而，在實際的免疫檢測中，由于待測樣品中所含的雜質成分較多，一定程度上影響了檢測靈敏度和準確性，所以從復雜的樣品基質中快速分離、純化出目的待測物，是臨床檢驗工作者面臨的難題之一。

磁微粒免疫檢測技術是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作載體，以物理吸附、化學偶聯等方法包被上具有特異性親和力的抗體或抗原等各種免疫活性物質，具有分離速度快、效率高、可重復性好、操作簡單、不影響被分離細胞或其他生物材料的生物學性狀和功能等特點，在外加磁場作用下可定向運動，使得某些特殊成分得以分離、濃集或純化。

中國發明專利公開CN101949943A公開了一種了促甲狀腺激素定量檢測試劑盒及其制備方法，其中，試劑盒包括包被有抗促甲狀腺激素單克隆抗體的磁微粒混懸液、促甲狀腺激素系列校準品、辣根過氧化物酶標記的抗促甲狀腺激素單克隆抗體、發光底物A液、發光底物B液以及濃縮洗液。使用該專利公開的試劑盒成功利用了磁微粒免疫檢測技術實現了對促甲狀腺激素的準確檢測。然而，該試劑盒的制備成本和使用成本高，原因是，一方面，在進行包被有抗促甲狀腺激素單克隆抗體的磁微粒混懸液的制備時，不僅過程復雜，而且直接將抗促甲狀腺激素單克隆抗體包被于磁微粒上的包被率較低，導致較高的成本；另一方面，其采取辣根過氧化物酶標記的抗促甲狀腺激素單克隆抗體，該抗體的制備也是非常繁瑣，且標記率低，限制其檢測效果和導致成本增加。此外，試劑盒在制備工藝上所存在的不易控和穩定性較差的因素，除了導致如前所述的成本增加的問題外，還使得檢測的批間差大，限制了檢測方法的精密度。