[發明專利]去除內毒素的細菌纖維素的制備方法

無效

• 申請號: 201210549565.6
• 申請日: 2012-12-17
• 公開（公告）號: CN102977392A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發明（設計）人: 薛燕;萬隆;沈靜飛
• 申請（專利權）人: 上海典范醫療科技有限公司
• 主分類號: C08J7/00
• 分類號: C08J7/00;C08L1/02
• 代理公司: 南通市永通專利事務所 32100
• 代理人: 葛雷

技術領域

本發明涉及一種細菌纖維素的制備方法。

背景技術

醫院臨床在使用藥品注射劑或醫療器械時，常有發生冷感、寒戰、發熱、頭痛、惡心、嘔吐、膚色灰白、休克、嚴重時導致死亡，這種癥狀稱為熱原反應，因微生物污染造成的熱原反應稱為內毒素熱原。細菌內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁上的一種脂多糖和微量蛋白的復合物，其化學成分主要是由O-特異性鏈、核心多糖、類脂A三部分組成，脂質A是內毒素的主要毒性成分。

內毒素廣泛分布于革蘭氏陰性菌及其它微生物的細胞壁層的脂多糖。革蘭氏陰性細菌產生的內毒素不容易在多糖純化過程中去除。世界衛生組織（WHO）推薦的在革蘭氏陰性類細菌多糖產品中內毒素的去除工藝為采用在100000g的離心力條件下超速離心4-6h，但該工藝不僅需要價格非常昂貴的超速冷凍離心機，且一次處理的樣品量受到限制。文獻報道的內毒素去除方法也有很多，根據作用方式的不同，可分為以下三類，①非選擇性方法，主要有超濾法、活性炭吸附法、相分離法；②層析法，主要包括離子交換層析、疏水層析和凝膠過濾層析；③選擇性方法，主要指親和吸附法，此外還包括金屬螯合物吸附法和氫氧化鋁吸附法，但這些方法對于用于醫療器械的生物材料都不是很好的方法。

細菌纖維素是指微生物來源的纖維素，又稱生物纖維素、納米纖維素，是一種天然的生物高聚物，由β-D-葡萄糖通過β-1，4-糖苷鍵連接而成的一種無分支的大分子直鏈聚合物，具有高結晶度、高純度、高持水性、獨特的三維網狀結構、高抗張強度和彈性模量等許多獨特的物理、化學和機械性能。此外細菌纖維素持水性高，其內部有很多“孔道”，有良好的透氣、透水性能，能吸收60-700倍于其干重的水分，并具有高濕強度，極好的形狀維持性能和形狀可調控性，可以任意裁剪，與皮膚有極好的貼附性。大量研究表明細菌纖維素具有良好的體內、體外生物相容性和良好的生物可降解性，但細菌纖維素中含有的內毒素具有先天性，因此，去除細菌纖維素中內毒素，使內毒素的限值在一定范圍之內，這對其在生物醫用材料領域的應用至關重要。

而一些天然或合成高分子具有抑菌作用，通過與細菌纖維素的混合可將其內毒素去除。如殼聚糖、聚乙二醇等來源廣泛，且有優異的抑菌、殺菌性能。

殼聚糖天然高分子（CS）具有優良的生物相容性、血液相容性、安全性、微生物降解性等，在生物醫學方面，殼聚糖具有促進血液凝固的作用，可用作止血劑，它還可用于傷口填料物質，具有滅菌、促進傷口愈合、吸收傷口滲出物、不易脫水收縮等作用。殼聚糖的抑菌作用可能有兩種機理，一種是殼聚糖通過正電荷的-NH₃吸附帶負電荷的細胞壁，使殼聚糖吸附在細胞膜表面形成一層高分子膜，改變了細胞膜的選擇透過性，阻止營養物質向細胞內的運輸，致使細胞質流失、細胞質壁分離，從而起到抑菌殺菌作用；另外一種機理是殼聚糖通過滲入進細胞體內，吸附細胞體內帶有陰離子的細胞質，并發生絮凝作用擾亂細胞正常的生理活動，從而殺滅細菌。

聚乙二醇（PEG），平均分子量在約200至6000的高聚物。通常是無色、無味的粘稠液體或固體，能夠溶于水、乙醇和許多其他的有機溶劑。其對熱很穩定，與其他化學品也不容易起反應，不宜水解、變質，無毒，對人體的眼睛、皮膚等也均沒有明顯刺激。

發明內容

本發明的目的在于提供一種有效去除細菌纖維素內毒素的去除內毒素的細菌纖維素的制備方法。

本發明的技術解決方案是：

一種去除內毒素的細菌纖維素的制備方法，其特征是：包括下列步驟：

（1）細菌纖維素膜預處理：將細菌纖維素用純化水清洗，控制細菌纖維素的pH值為7-7.2，得到預處理的細菌纖維素膜，冷藏備用；

（2）配制PEG水溶液：溶液濃度為質量百分比濃度40%-75%；

（3）殼聚糖的溶解：準確稱取殼聚糖，加入稀醋酸溶液并配合磁力攪拌器攪拌，使溶質充分溶解，制得濃度為0.1%-5%的殼聚糖溶液；

（4）將細菌纖維素置于PEG水溶液或殼聚糖溶液中，加熱至80℃以上，水浴溫度保持80-100℃，保持時間0.5-1.5h；

（5）將蒸煮過的細菌纖維素膜用純化水清洗，得產品。

將步驟（5）得到的細菌纖維素膜產品進行滅菌處理。

所述PEG為PEG-200、PEG-400、PEG-600、PEG-800、PEG-1000、PEG-1500的一種或幾種。

所述稀醋酸溶液的濃度為0.5%~5%。