[發(fā)明專利]利用木薯渣發(fā)酵生產(chǎn)中性蛋白酶和飼料添加劑的方法無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201210549405.1 | 申請(qǐng)日： | 2012-12-17 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN103013961A | 公開(kāi)（公告）日： | 2013-04-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 朱明軍;陳鴻圖 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 華南理工大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N9/56 | 分類號(hào)： | C12N9/56;A23K1/165;C12R1/125 |
| 代理公司： | 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245 | 代理人： | 蘇運(yùn)貞;裘暉 |
| 地址： | 510640 廣*** | 國(guó)省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 利用 木薯 發(fā)酵 生產(chǎn) 中性 蛋白酶 飼料添加劑 方法 | ||
1.一種利用木薯渣發(fā)酵生產(chǎn)中性蛋白酶和飼料添加劑的方法，其特征在于包含以下步驟：
（1）菌種的活化：將枯草芽孢桿菌接種到斜面培養(yǎng)基上，進(jìn)行活化；斜面培養(yǎng)基組成為：胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化鈉10g/L，瓊脂20g/L，pH值為8.0；
（2）種子液的制備：將活化的枯草芽孢桿菌接種到種子培養(yǎng)基中，25～30℃、150～200rpm培養(yǎng)至OD600為1.4～1.6；再以體積百分比5%的接種量轉(zhuǎn)接種子培養(yǎng)基中，25～30℃、150～200rpm培養(yǎng)5～10h；將菌液離心，取沉淀，用生理鹽水懸浮沉淀，即得種子液；種子培養(yǎng)基組成為：胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化鈉10g/L，pH值為8.0；
（3）中性蛋白酶發(fā)酵：中性蛋白酶發(fā)酵通過(guò)搖瓶好氧發(fā)酵或是發(fā)酵罐發(fā)酵進(jìn)行：
①搖瓶好氧發(fā)酵：將步驟（2）制備的種子液以體積百分比5%的接種量接到發(fā)酵培養(yǎng)基中，25～30℃、150～200rpm搖瓶好氧培養(yǎng)至少36小時(shí)；
②發(fā)酵罐發(fā)酵：將步驟（2）制備的種子液以體積百分比5%的接種量接到發(fā)酵培養(yǎng)基中，控制轉(zhuǎn)速200～1000rpm，通氣量0.5～2.0vvm，使溶氧控制在30%，當(dāng)pH值下降到6.5以下時(shí)，流加1mol/L鹽酸控制pH在6.5，使用體積百分比為25%的泡敵進(jìn)行泡沫控制，培養(yǎng)至少36小時(shí)；
發(fā)酵培養(yǎng)基：木薯渣10～80g/L，豆粕粉10～40g/L，麩皮10～40g/L，Na2HPO44g/L，KH2PO40.3g/L，pH為7.5～8.5；
（4）粗酶液分離及飼料添加劑的制備：將步驟（3）得到的發(fā)酵液離心，上清液為中性蛋白酶粗酶液；沉淀干燥后，得到飼料添加劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用木薯渣發(fā)酵生產(chǎn)中性蛋白酶和飼料添加劑的方法，其特征在于還包含以下步驟：（5）中性蛋白酶的提取：將步驟（4）得到的中性蛋白酶粗酶液置于冰水浴中，邊攪拌邊加入硫酸銨，使達(dá)到40%飽和度，置于4℃下靜置過(guò)夜，離心，取上清，在上清液補(bǔ)加硫酸銨至60%飽和度，置于4℃下靜置過(guò)夜，離心，收集沉淀；將沉淀真空冷凍干燥，得到中性蛋白酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用木薯渣發(fā)酵生產(chǎn)中性蛋白酶和飼料添加劑的方法，其特征在于：步驟（5）中所述的離心的條件為4℃、10000rpm離心30min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用木薯渣發(fā)酵生產(chǎn)中性蛋白酶和飼料添加劑的方法，其特征在于：步驟（1）中所述的枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌AS1.398。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用木薯渣發(fā)酵生產(chǎn)中性蛋白酶和飼料添加劑的方法，其特征在于：步驟（2）中所述的離心的條件為4℃、5000rpm離心10min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用木薯渣發(fā)酵生產(chǎn)中性蛋白酶和飼料添加劑的方法，其特征在于：步驟（3）①中所述的搖瓶好氧培養(yǎng)的時(shí)間為36～72h。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用木薯渣發(fā)酵生產(chǎn)中性蛋白酶和飼料添加劑的方法，其特征在于：步驟（3）②中所述的培養(yǎng)的時(shí)間為36～60h。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用木薯渣發(fā)酵生產(chǎn)中性蛋白酶和飼料添加劑的方法，其特征在于：步驟（4）中所述的離心的條件為4℃、10000rpm下離心20min。
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