[發明專利]一種抗BP180 NC16A IgE抗體的酶聯免疫檢測試劑盒及檢測方法無效
| 申請號： | 201210548486.3 | 申請日： | 2012-12-17 |
| 公開（公告）號： | CN103278640A | 公開（公告）日： | 2013-09-04 |
| 發明（設計）人： | 左亞剛;劉冰;孫秋寧 | 申請（專利權）人： | 中國醫學科學院北京協和醫院 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京市德權律師事務所 11302 | 代理人： | 劉麗君 |
| 地址： | 100730*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 bp180 nc16a ige 抗體 免疫 檢測 試劑盒 方法 | ||
1.一種抗BP180NC16A?IgE抗體的酶聯免疫檢測試劑盒，包括檢測試劑，其特征在于，所述檢測試劑的制備方法包括以下步驟：
步驟11：向E.coli?DH5α感受態細胞懸液中加入重組質粒pGEX-2T抗BP180NC16A的DNA，表達抗BP180?NC16A蛋白；
步驟12：對所述抗BP180?NC16A蛋白進行提純，得到純化的抗BP180?NC16A蛋白；
步驟13：對所述純化的抗BP180?NC16A蛋白進行濃縮，得到濃縮的抗BP180?NC16A蛋白；
步驟14：向所述濃縮的抗BP180?NC16A蛋白中加入PBS，使其稀釋至500μg/mL，得到抗原包被液；
步驟15：對所述抗原包被液進行包被后封閉，得到所述檢測試劑。
2.一種抗BP180?NC16A?IgE抗體的酶聯免疫檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟21：向權利要求1所述的試劑盒的反應孔中加入反應樣本，在30℃恒溫條件下一抗孵育，2h后用PBST第Ⅰ次洗板；
步驟21’：用BSA封閉液將HRP標記的IgE抗體原液稀釋1000倍，得到二抗稀釋液；
步驟22：向經過第Ⅰ次洗板的試劑盒的反應孔中加入所述二抗稀釋液，在30℃恒溫條件下二抗孵育，1h后用PBST第Ⅱ次洗板；
步驟23：向經過第Ⅱ次洗板的試劑盒的反應孔中加入顯色液，在30℃恒溫條件下顯色，得到樣本試劑盒；
按照步驟21、步驟21’、步驟22、步驟23，同時得到待測樣本試劑盒和至少3個陰性對照樣本試劑盒；
步驟24：顯色終止后以酶標儀分別讀取待測樣本試劑盒和陰性對照樣本試劑盒在波長為450nm、參考波長為620nm處的吸光度，若待測樣本的吸光度＞陰性對照樣本吸光度均值+2SD，則檢測結果為陽性，若待測樣本吸光度＜陰性對照樣本吸光度均值+2SD，則檢測結果為陰性。
3.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述待測樣本為經過PBS以1∶10稀釋的血清或者水皰。
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