[發明專利]一種用高效液相色譜純化臺勾霉素B的方法

有效

• 申請號: 201210546760.3
• 申請日: 2012-12-17
• 公開（公告）號: CN102993251A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 江必旺;陳榮姬;潘毅;吳俊成
• 申請（專利權）人: 蘇州納微生物科技有限公司
• 主分類號: C07H17/08
• 分類號: C07H17/08;C07H1/06
• 代理公司: 蘇州華博知識產權代理有限公司 32232
• 代理人: 傅靖

技術領域

本發明涉及一種純化方法，特別是一種高效液相色譜純化臺勾霉素B的方法。

背景技術

臺勾霉素(tiacumicins)是由放線菌指孢囊菌Dactylosporangium?aurantiacumsubsp.hamdenensis?NRRL?18085?產生的一系列18元環大環內酯類抗生素的總稱。臺勾霉素具有抗各種革蘭氏陽性細菌的活性，特別是針對艱難梭菌和結核桿菌具有明顯的抗菌活性，同時還具有抗腫瘤活性。研究發現臺勾霉素中tiacumicn?B?是最好的活性組分，擁有兩個脫氧糖基和一個芳香環支鏈，C-18為R-羥基，對艱難梭菌具有較低的最小抑制濃度值。臺勾霉素B（Tiacumicin?B）是指具有下列結構的分子：

。

臺勾霉素B因其疏水性很強，在水中幾乎不溶，所以一般采用反相色譜的方法制備。

中國專利?102219815A公開了一種從孢囊菌制備臺勾霉素類化合物的方法，該方法包括用凝膠?Sephadex?LH-20和硅膠?YMCGEL?ODS-A反相中壓色譜法和薄層層析法相結合從孢囊菌發酵產物中分離出純度低的臺勾霉素類化合物。

中國專利?102030791?A公開了四種臺勾霉素類化合物的制備方法，該方法采用大孔吸附樹脂XAD16從發酵液中提取出粗提物，然后結合萃取和濃縮得到粗品，這些粗品純度較低，還要經過正相硅膠層析、凝膠柱層析和反相中壓色譜才能分別得到四種臺勾霉素類化合物。

中國專利1688707A公開了一種臺勾霉素的制備及純化方法，該方法采用反相介質壓力液相色譜法，以硅膠鍵C18為固相，以MeCN/H₂O/AcOH為流動相，將收集液中的產品經萃取和重結晶后得到純度93%及回收率30%的產品。

在這些現有技術中，均存在因純化介質的分離因子低和柱效差的不足，而使產品的純度達不到要求、收率較低的問題，分離效果有待進一步提高。

發明內容

本發明的目的是提供一種產品純度高、回收率高、分離效果更好的臺勾霉素B純化方法。

為達到上述目的，本發明的技術方案是：一種用高效液相色譜純化臺勾霉素B的方法，所述方法在純化層析柱中采用Uni30BPC單分散性聚合物微球作為填料進行柱層析。該Uni30BPC單分散性聚合物微球由蘇州納微生物科技有限公司設計、制造生產，具有對臺勾霉素B分離因子高，柱效好的特點，并且能耐強酸、強堿，耐一定的壓力和具有均勻的粒徑。Uni30BPC單分散性聚合物微球作為填料裝入層析柱中作為固定相，甲酸水溶液和有機溶劑作為流動相，填料經過預處理后先用流動相平衡。

優選的，所述方法是用Uni30BPC單分散性聚合物微球作為色譜柱的固定相，將含臺勾霉素B的樣品溶液上樣在色譜柱上，用流動相洗脫吸附在填料上的臺勾霉素B。

優選的，所述方法在裝柱和純化過程中的壓力均小于4?Mpa。

優選的，所述臺勾霉素B粗品用40%～80%的甲醇或乙醇水溶液溶解。

優選的，所述流動相為含有機溶劑的水溶液，其中有機溶劑為甲醇或乙腈，水溶液為含有0.1%甲酸或乙酸的水溶液。

優選的，所述用流動相洗脫吸附在填料上的臺勾霉素B是先用10%～30%的乙腈或甲醇水溶液洗一個柱體積，然后再用40%～60%的乙腈或甲醇水溶液洗8～12個柱體積，即洗雜；其中水溶液為含有0.1%甲酸的水溶液。

優選的，所述用流動相洗脫吸附在填料上的臺勾霉素B是先用10%～30%的乙腈水溶液洗一個柱體積，然后再用40%～60%的乙腈水溶液洗8～12個柱體積，即洗雜；其中水溶液為含有0.1%甲酸的水溶液。

優選的，所述方法在洗雜過程中所用乙腈水溶液的體積比為乙腈：水＝15～25:75～85。

優選的，所述方法在洗雜過程中所用乙腈水溶液的體積比為乙腈：水＝45～55:45～55。

本發明提供了一種分離效果更好的臺勾霉素B純化方法，本方法采用一種分離因子高、柱效高的新型介質，克服了現有技術中存在的分離因子較低和柱效差的不足，對臺勾霉素B中的各種雜質都有較好的去除效果，制備的純度高，得到的回收率高。

附圖說明

圖l是實施例一使用的Uni30BPC聚合物微球的掃描電鏡照片。

圖2是實施例一提純前的粗品的HPLC色譜。

圖3是按照實施例一、二、三、四的方法用Uni30BPC純化后的臺勾霉素B的HPLC色譜。