[發(fā)明專利]桑黃菌中甲基苯二酚的分離技術(shù)

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210546460.5
• 申請(qǐng)日: 2012-12-15
• 公開（公告）號(hào): CN103044208A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋愛榮;趙晨;孫效樂;黃芳;田雪梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07C39/08
• 分類號(hào): C07C39/08;C07C37/82
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.桑黃菌中甲基苯二酚的分離方法，其步驟順序如下：

(1)?制備桑黃粗提物；

(2)將步驟（1）中所得的乙醇沉淀物與正相硅膠混勻攪拌，干燥后進(jìn)行硅膠正相柱層析，用洗脫劑洗脫2-5次，得到洗脫液；

(3)將步驟（2）中最后一次洗脫液蒸干，等體積硅膠拌樣，進(jìn)行正相硅膠層析，用洗脫劑洗脫；

(4)收集步驟（3）中的洗脫液，減壓濃縮，使用氯仿：甲醇=1:1溶解，甲醇凝膠柱層析，使用洗脫劑洗脫；

(5)收集步驟（4）得到的洗脫液，使用TLC檢測各洗脫液，適度合并洗脫液，減壓干燥，即為甲基苯二酚。

2.如權(quán)利要求1所述的一種從桑黃菌中分離苯乙醇的方法，其特征在于所述桑黃粗提物，由下述方法制得：

(1)發(fā)酵培養(yǎng)基配方以克/100毫升計(jì)是：

玉米淀粉????1-5%?????????????葡萄糖??????1-5%

蛋白胨?????0.1-0.5%??????????酵母膏?????0.1-0.5%

硫酸鎂?????0.1-0.5%??????????磷酸二氫鉀?0.01-0.05%

(2)如權(quán)利要求1所述桑黃粗提物的發(fā)酵培養(yǎng)方法是，將桑黃菌種以常規(guī)方法接種到裝有液體培養(yǎng)基的三角燒瓶內(nèi)，以20～35℃溫度，搖瓶轉(zhuǎn)速為80～280r/min，pH?3～8條件下，震動(dòng)培養(yǎng)7～15天；培養(yǎng)中當(dāng)pH值降到2.5～4時(shí)，將搖瓶中的種子接種到50L發(fā)酵罐的培養(yǎng)液中，以溫度20～35℃，發(fā)酵罐壓力0.1～0.2公斤/平方厘米，pH?3～8，通氣量0.5～1.1vvm，攪拌速度100～280轉(zhuǎn)/分的條件，培養(yǎng)7～15天，即可利用桑黃菌絲體發(fā)酵全液制備桑黃粗提物；

(3)取步驟(2)中所得桑黃菌絲體發(fā)酵全液，將其以常規(guī)方式減壓濃縮，使其體積濃縮到原體積的1/2～1/5；

(4)用體積百分比為60～95%的乙醇對(duì)上述步驟(3)濃縮后的發(fā)酵液進(jìn)行提取，其中，加入乙醇的量是濃縮液體積的2～5倍，能夠使提取液中乙醇濃度達(dá)到60～90%；

(5)對(duì)步驟(4)所得提取液在50～70℃條件下，加熱1～2小時(shí)；以常規(guī)方法進(jìn)行分離，并通過二級(jí)過濾除去雜質(zhì)，分離獲得乙醇提取液；將上述乙醇提取液以常規(guī)方式減壓濃縮，使其體積濃縮到原體積的1/5～1/10；

(6)將將步驟(5)所得的濃縮液以低溫冷凍干燥的方法進(jìn)行干燥，得桑黃粗提物；

如權(quán)利要求1所述的桑黃菌中甲基苯二酚的分離方法，其特征在于所述的甲基苯二酚為4-甲基-1,2-苯二酚。

3.如權(quán)利要求1所述的桑黃菌中甲基苯二酚的分離方法，其特征在于，步驟(2)中所述的拌樣硅膠為100-200目正相硅膠。

4.如權(quán)利要求1所述的桑黃菌中甲基苯二酚的分離方法，其特征在于，步驟(2)中所述的層析硅膠為正相200-300目，洗脫劑為氯仿和/或甲醇。

5.如權(quán)利要求1所述的桑黃菌中甲基苯二酚的分離方法，其特征在于，步驟(3)中所述的硅膠用量為等體積，洗脫劑為石油醚：丙酮=20：1-40:1。

6.如權(quán)利要求1所述的桑黃菌中甲基苯二酚的分離方法，其特征在于，步驟(4)中所述的凝膠為Sephadex?LH-20，洗脫劑為氯仿：甲醇=1:1。

7.如權(quán)利要求1所述的桑黃菌中甲基苯二酚的分離方法，其特征在于，步驟(5)所述的檢測要點(diǎn)是出現(xiàn)粉紅色斑點(diǎn)，展開劑為石油醚：丙酮=20：1-40:1。