[發明專利]一種獸用抗生素阿維拉霉素分離純化的方法

有效

• 申請號: 201210544526.7
• 申請日: 2012-12-13
• 公開（公告）號: CN103012519A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 王宏;陳敏;潛緩緩
• 申請（專利權）人: 浙江凱勝科技有限公司;浙江工商大學
• 主分類號: C07H17/04
• 分類號: C07H17/04;C07H1/06
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 周世駿

技術領域

本發明涉及的是一種獸用抗生素阿維拉霉素分離純化的方法，屬于工業生物技術、生物醫藥領域。

背景技術

阿維拉霉素（Avilamycin）是由綠色產色鏈霉菌（Streptomyces?viridoehrongenes）發酵而成的二氯異扁枝衣酸酯，屬于正糖霉素族的寡糖類抗生素。它主要抑制革蘭氏陽性菌，對革蘭氏陰性菌效果較差，是一種新型的抗菌促生長劑。在畜禽業中，因其安全性高、不存在交叉耐藥性及良好穩定的促生長效果，越來越受到人們的重視。阿維拉霉素是一種混合型低聚糖類抗生素，目前發現有A、B、C、D、F、G、H等多種結構。其中最具活性的是阿維拉霉素A組分，分子式為C₆₁H₈₈Cl₂O₃₂，分子量為1403；其次為阿維拉霉素B，分子式為C₅₉H₈₄Cl₂O₃₂，分子量為1375；其他成分活性很小，在鏈霉菌中含量也很低。

阿維拉霉素的分離純化方法主要是通過脫色、結晶、過柱等幾個步驟來完成，但是目前相關研究還很少，技術很不成熟，市場上阿維拉霉素的純品幾乎沒有。國內大部分企業和用戶均以已知含量的預混劑作為對照品來控制生產，導致分析結果產生較大偏差。所以制備阿維拉霉素單組分純品可以為含阿維拉霉素樣品的檢測提供有效保障，對阿維拉霉素的研究和生產具有重大的現實意義。

發明內容

本發明要解決的問題是：克服現有技術中阿維拉霉素分離純化技術的不足之處，提出一種可行的獸用抗生素阿維拉霉素分離純化方法。

為解決該技術問題，本發明的技術方案是：

提供一種獸用抗生素阿維拉霉素分離純化的方法，包括以下步驟：

（1）阿維拉霉素菌絲體經過浸提、結晶得到阿維拉霉素粗提物

將含有阿維拉霉素的菌絲體加入有機試劑中，在溫度不超過40℃的條件下超聲90~120?min，3000?r/min條件下離心10?min，得上清液即為浸提液；按浸提液∶水的體積比為1∶1~?1∶2進行補水結晶，4000?r/min條件下離心15?min，40℃下烘干得阿維拉霉素粗提物；

所述有機試劑為甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙脂、乙腈或氯仿中的一種或幾種的組合，阿維拉霉素菌絲質量與有機試劑體積之比為1∶30~?1∶50；

（2）阿維拉霉素粗提物經過硅膠柱層析得到阿維拉霉素A和B的混合物

以3%的2-丙醇氯仿溶解阿維拉霉素粗提物，上硅膠柱。在1?mL/min的流速下以3%?的2-丙醇氯仿洗脫；阿維拉霉素粗提物∶硅膠的質量比為1∶50~1∶70；

采用硅膠厚度為0.2?mm的硅膠HF254板進行薄層層析色譜（TLC）追蹤斑點，根據斑點位置進行分段收集；目標部分的洗脫液在40℃下旋轉蒸發并烘干得到阿維拉霉素A和阿維拉霉素B的混合物；

（3）阿維拉霉素A和阿維拉霉素B的混合物過十八烷基鍵合相硅膠（ODS）柱分離得到阿維拉霉素A和阿維拉霉素B的純品

取80~120?mg阿維拉霉素A和阿維拉霉素B的混合物，以乙腈溶解后上ODS柱，ODS質量為100?g；采用乙酸銨水溶液-乙腈溶劑體系為洗脫液，在1?mL/min的流速下進行洗脫，洗脫液中乙酸銨水溶液與乙腈的體積比為55∶45；

采用硅膠厚度為0.2?mm的硅膠HF254板進行薄層層析色譜（TLC）追蹤斑點，根據斑點位置進行分段收集；目標部分阿維拉霉素A和阿維拉霉素B的洗脫液分別按洗脫液∶水的體積比為1∶1~1∶2進行加水重結晶，抽濾后結晶用純水漂洗，40℃下烘干后即獲得阿維拉霉素A和B阿維拉霉素純品。

作為一種改進，步驟（1）中所述浸提用的有機試劑為體積比1∶1的甲醇和氯仿混合液。

本發明所得阿維拉霉素A和阿維拉霉素B的純品的平均得率為37.50%。并且阿維拉霉素A和阿維拉霉素B的純度在98%以上。

本發明與現有技術相比，具有如下特點：

（1）本發明最終得到的純品分別是阿維拉霉素A和阿維拉霉素B的純品，而不是阿維拉霉素各組分混合的純品；（2）本發明純化步驟簡便，易操作；（3）本發明獲得阿維拉霉素A和阿維拉霉素B純品的平均得率在37.50%以上，與其他阿維拉霉素分離純化方法相比有所提高；（4）本發明獲得的阿維拉霉素A和阿維拉霉素B純品的純度在98%以上，在阿維拉霉素測定中可作為對照品。

具體實施方式

本發明的實現路線是：