[發明專利]一種高密度培養高芽孢率枯草芽孢桿菌的方法

有效

• 申請號: 201210544003.2
• 申請日: 2012-12-15
• 公開（公告）號: CN103865826A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 李淘洪;周來薪
• 申請（專利權）人: 重慶江合生物科技有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/125
• 代理公司: 云南派特律師事務所 53110
• 代理人: 岳亞蘇

技術領域

本發明涉及一種高密度培養高芽孢率枯草芽孢桿菌的方法。

背景技術

枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）是一種產芽孢的G+細菌，其菌體生長過程中產生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短桿菌肽等活性物質，對致病菌或內源性感染的條件致病菌有明顯的抑制作用；迅速消耗環境中的游離氧，造成腸道低氧，促進有益厭氧菌生長，并產生乳酸等有機酸類，降低腸道PH值，抑制其它致病菌生長；刺激動物免疫器官的生長發育，激活T、B淋巴細胞，提高免疫球蛋白和抗體水平，增強細胞免疫和體液免疫功能，提高群體免疫力；能合成維生素B1、B2、B6、煙酸等多種B族維生素，提高動物體內干擾素和巨噬細胞的活性。對人或動植物沒有致病性，兼有生物治病和生物保健作用，已廣泛應用于農業、畜牧業及污水廢水處理等領域。我國農業部將其列為免做安全鑒定的一級菌種。

枯草芽孢桿菌是一種可利用蛋白質、多種糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。在遺傳學研究中應用廣泛，對此菌的嘌呤核苷酸的合成途徑與其調節機制研究較清楚。廣泛分布在土壤及腐敗的有機物中，易在枯草浸汁中繁殖。枯草芽孢桿菌對水產中的弧菌、大腸桿菌和桿狀病毒等有害細菌有很強的抑制作用，有效預防水產動物腸炎，爛鰓等疾病。分泌大量幾丁質酶的功能，幾丁質酶可分解病原真菌的細胞壁而抑制真菌病害，分解養殖池中的有毒有害物質，凈化水質；分解池中殘餌、糞便、有機物等,具有很強的清理水中垃圾小顆粒的作用；枯草芽孢桿菌改善有害藍藻泛溢造成的水質渾濁問題，水質由渾變清，具有很強的凈化水質功能，具有較強的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性，促進飼料中營養素降解，使水產類動物對飼料的吸收利用更加充分；枯草芽孢桿菌可以減少對蝦病害發生，可以大大提高對蝦產量，從而提高經濟效益，生物環保，刺激水產動物免疫器官的發育，增強機體免疫力；減少對蝦病害發生，明顯提高對蝦產量，從而提高經濟效益，凈化水質，無污染，無殘留。

傳統水產養殖業中對于水質凈化這個領域，使用物理過濾凈化的化學物質凈化是主要方法，費時費力，對經濟能力的要求也很高，同時兩種方法不能從根本上解決水質污染的問題，只是把浸染物以另一種形式“貯存”，屬于治標不治本的做法。枯草芽孢桿菌用于水質凈化，其作用機理就是達到治本的目的，分解降解水體中有毒有害物質的同時，抑制水中有害細菌、藻類生長的，達到徹底凈化水質預防水產病害的效果。因此，枯草芽孢桿菌是極具開發前景和應用價值的有用細菌。

目前國內對枯草芽孢桿菌的研究主要集中在菌種的篩選、分離鑒定、抑菌效果、發酵液化學成分的分析、一般培養基的制作，而對于枯草芽孢桿菌的發酵培養方面報道甚少，關于芽孢率的報道更少，現有的培養方法其芽孢率一般為80%左右，其生產率不夠理想，人們一直在為提高芽孢率致力研究。

發明內容

本發明提出了一種高密度培養高芽孢率枯草芽孢桿菌的方法，解決了現有技術中的不足，通過在發酵培養中加入促芽孢生成培養基，提高了培養的芽孢率。

本發明的技術方案是這樣實現的：一種高密度培養高芽孢率枯草芽孢桿菌的方法，它以枯草芽孢桿菌為菌種，經活化后接種到發酵培養基中培養，所述發酵培養時添加有促芽孢生成培養基。

其中，所述活化采用的培養基由以下重量百分比的原料組成：牛肉膏0.1-0.5％、蛋白胨0.5-1.5％、葡萄糖0.5-1.5％、氯化鈉0.3-0.7％、瓊,1-3％，蒸餾水為余量。

進一步的，所述活化采用的培養基由以下重量百分比的原料組成：牛肉膏0.3％、蛋白胨1.0％、葡萄糖1.0％、氯化鈉0.5％、瓊脂2.0％，蒸餾水93.2%。

更進一步的，所述活化培養的條件為：調整PH值7.0-7.2，溫度為36.5-37℃，活化20-24h。

其中，所述發酵培養基由以下重量百分比的原料組成：葡萄糖1.4-1.8％、淀粉0.18-0.26％、豆粕2.8-3.2%、硫酸錳0.05-0.15％、磷酸氫二鉀0.25-0.35％、磷酸二氫鉀0.1-0.2％、硫酸鎂0.02-0.07％、酵母膏0.019-0.025％、氯化鐵0.05-0.015％、碳酸鈣0.005-0.015％、水為余量。

進一步的，所述發酵培養基由以下重量百分比的原料組成：葡萄糖1.6％、淀粉0.22％、豆粕3.0%、硫酸錳0.1％、磷酸氫二鉀0.3％、磷酸二氫鉀0.15％、硫酸鎂0.05％、酵母膏0.022％、氯化鐵0.01％、碳酸鈣0.01％、水94.538%。