[發(fā)明專利]草莓防褐變專用初代培養(yǎng)基及其生產組培草莓苗的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210540779.7
• 申請日: 2012-12-14
• 公開（公告）號: CN102986534A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發(fā)明（設計）人: 畢德
• 申請（專利權）人: 蘇州和美生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 蘇州市新蘇專利事務所有限公司 32221
• 代理人: 許鳴石

技術領域

本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術領域，特別涉及一種防止草莓組織培養(yǎng)過程中褐變的培養(yǎng)基及利用其組培繁育草莓苗的方法。

技術背景

草莓是薔薇科草莓屬多年生草本植物，是世界七大水果之一，營養(yǎng)豐富，有“水果皇后”的美稱。另外食用草莓對腸胃病和貧血病有一定的療效，對促進智力發(fā)育有重要作用。深受國內外消費者的喜愛。

草莓是一種栽培周期短、結果早、見效快的經濟作物，但是草莓的病毒害嚴重影響草莓的生產。作為高級漿果的草莓，在我國目前的生產栽培上多沿用無性繁殖種苗：主要方法是匍匐莖繁殖和分株繁殖，但這兩種方法效率低、種苗易退化、易造成病毒蔓延。王國平（1988）等調查，我國栽培草莓帶病毒植株率過80%以上，戴子林（1995）等調查，我國長江流域感染大面積植株感染率在50%以上，感染了病毒病的草莓結果會存在變小、畸形、品質差、生長緩慢等問題，一般減產30%-80%，并逐年加重；嚴重影響草莓的長勢、品質和產量，對病毒病目前還沒有藥劑可以防治。

目前，解決草莓病毒病的主要方法是通過草莓脫毒組培技術來擴繁草莓脫毒苗，使草莓種苗回復品種的優(yōu)良性狀以達到優(yōu)質、高產的目的。目前，常見草莓外植體組織培養(yǎng)類型包括：草莓莖尖組織培養(yǎng)、草莓葉片和葉柄組織培養(yǎng)、草莓莖段組織培養(yǎng)、草莓花藥培養(yǎng)。草莓組織培養(yǎng)程序一般可分為外植體準備、苗誘導、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、移植馴化等幾個階段，其中在每個階段的培養(yǎng)基選用、溫室條件等對組培苗的繁育系數、脫毒效果、再生率等關鍵參數有著重要影響。其中MS培養(yǎng)基是草莓組培過程中最常用的培養(yǎng)基，即Murashige和Skoog于1962年為煙草細胞培養(yǎng)設計的具備較高無機鹽和離子濃度的穩(wěn)定培養(yǎng)基，其硝酸鹽含量高、養(yǎng)分的數量和比例合適，能夠保證組織生長所需的礦質營養(yǎng)還能加速愈傷組織的生長，是目前被廣泛應用于植物組織培養(yǎng)快速繁殖的基本培養(yǎng)基。

但是，在草莓組織培養(yǎng)中，褐變是影響初代培養(yǎng)褐化和限制初代培養(yǎng)再生率的重要原因，即外植體或培養(yǎng)材料接種后在組織培養(yǎng)過程中，由于切割造成機械損傷，傷口處分泌出酚類化合物，在有氧的條件下，切面細胞中的酚類物質為多酚氧化酶催化，氧化為醌，醌再通過非酶促反應產生有色物質而導致組織褐變，變成棕褐色或暗褐色，并逐漸擴散到培養(yǎng)基中，抑制細胞內其它酶的活性，影響細胞的正常代謝，毒害整個組織，甚至導致組織死亡。

中國發(fā)明專利（申請?zhí)?01010252871.4）公開了一套草莓莖尖組培專用的初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基以及用該系列培養(yǎng)基培養(yǎng)草莓莖尖組織生產脫毒苗的方法。其所述的初代培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并在其中添加濃度為0.2-0.5?mg/L的6-芐氨基嘌呤（BA）和0.1-0.2?mg/L的萘乙酸（NAA），并在初代培養(yǎng)時進行暗培養(yǎng)預防褐化，但其防止褐變的主要手段還是在于減少光照以抑制PPO的活性，防止多酚類物質的氧化，從而減少被培養(yǎng)的組織褐變。但這種技術手段下初代培養(yǎng)的成活率僅從普通的40%左右提升到50-65%，還有提升的空間。

王棟等在《植物組織培養(yǎng)中的褐化現象及其防止措施》（黑龍江農業(yè)科學2008(1)：7～1O）中分析了植物組織培養(yǎng)過程中出現褐變的若干因素，并公開了利用吸附劑（有聚乙烯吡咯烷酮、活性炭等）和抗氧化劑（抗壞血酸、硫代硫酸鈉、檸檬酸、L一半胱氨酸、谷胱甘肽、蕓香苷、二硫蘇糖醇、酪氨酸、巰基乙醇、卵清蛋白、維生素B、維生素E、有機酸、蛋白質水解產物、氨基酸、亞硫氫酸鈉、氰化鉀、多胺）等用來減少植物組織培養(yǎng)中的褐變現象。其主要原理在于通過吸附組織培養(yǎng)過程中由于切割造成機械損傷處分泌的酚類化合物，或者通過上述抗氧化劑防止擴散到培養(yǎng)基中的酚類化合物被氧化成褐色的醌類物質，從而達到防止褐變的作用。但是，這種方法的不足之處在于只能被動解決擴散到培養(yǎng)基質中的酚類化合物，在實際生產過程中還是會存在較高的褐變現象。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于：提供一種相對于現有防褐變技術能更有效預防草莓組織培養(yǎng)過程中發(fā)生褐變的專用初代培養(yǎng)基。

本發(fā)明的另一目的在于：提供一種再生率高的組培草莓苗生產方法。

本發(fā)明的技術方案是：一種能有效預防草莓組織培養(yǎng)過程中發(fā)生褐變的專用初代培養(yǎng)基，以0.2-0.5?mg/L的6-芐氨基嘌呤（BA）和0.1-0.2?mg/L的萘乙酸（NAA）的MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并在其中添加濃度為5-15?mg/L的抗壞血酸（VC）和0.001-0.5?mg/L的油菜素內酯（BR），其中pH值保持在5.7-5.8；