[發明專利]一種鄰苯二甲酸二丁酯的化學發光檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201210540682.6
• 申請日: 2012-12-14
• 公開（公告）號: CN103869069A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 何方洋;萬宇平;馮才偉;馮月君;朱亮亮;馮靜;孫震
• 申請（專利權）人: 北京勤邦生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N21/76
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種檢測鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）的化學發光酶免疫檢測試劑盒，用于檢測白酒中的DBP含量或殘留量。屬于免疫學檢測領域。

背景技術

鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）屬于鄰苯二甲酸酯類，是目前國內外工業生產中使用最多的塑化劑（又稱增塑劑），廣泛存在于食品包裝、化妝品、醫療器材以及環境水體中。這類塑化劑并非食品或食品添加物，但會通過環境遷移、食品包裝遷移及非法添加等進入食品，對人體健康產生毒害作用，如造成內分泌失調，影響正常生育能力，在體內長期蓄積會導致畸形、癌變和突變，對心血管、消化和泌尿系統也有很大傷害。因此，我國衛生部衛辦監督函〔2011〕551號文件中規定：嚴禁在食品、食品添加劑中人為添加鄰苯二甲酸酯類物質，食品、食品添加劑中的鄰苯二甲酸二（α-乙基已酯）（DEHP）、鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）和鄰苯二甲酸二正丁酯（DBP）最大殘留量分別為1.5mg/kg、9.0mg/kg和0.3mg/kg。

目前文獻報道有關鄰苯二甲酸酯類物質的檢測方法有氣相色譜法、超高效液相色譜法、高效液相色譜-質譜法、氣相色譜-離子阱質譜法等。但研究大多集中于環境樣品和塑料包裝材料，對于食品中的污染情況檢測研究較少。我國食品中鄰苯二甲酸酯檢測使用“GB/T?21911-2008《食品中鄰苯二甲酸酯的測定》”，包裝中鄰苯二甲酸酯檢測使用“GB/T?21928-2008《食品塑料包裝材料中鄰苯二甲酸酯的測定》”，兩種檢測方法均運用氣相色譜-質譜聯用（GC-MS）的方法進行測定。該方法靈敏、準確，特異性強、分離度好，可以同時測定多種藥物，但需要昂貴的儀器、樣品的前處理復雜、繁瑣費時、檢測的成本較高，不能現場操作，而且需專業人員操作，所以限制了其應用。與之相比，化學發光酶免疫測定法具有特異性好、靈敏度高、操作簡便、檢測成本低、適合于批量樣品的篩選檢測等優點，而且所需設備少，操作簡單易學，成本低廉，能夠更好地滿足我國食品企業、政府職能監管部門等開展檢測工作。

發明內容

本發明的目的是提供一種DBP的化學發光酶免疫檢測試劑盒。該試劑盒具有檢測靈敏度高、應用靈活、方便的特點，可用于白酒中DBP的殘留量檢測。

為實現上述目的，本發明主要是利用抗原與抗體的特異性免疫反應的基本原理來實現的。化學發光免疫分析法是化學發光法和免疫分析法結合的產物，因此同時具有化學發光法的高靈敏性和免疫分析法的高特異性。在整個反應過程中，樣品中DBP含量越高，反應體系中發光強度越弱；反之，樣品中DBP含量越少，發光強度越高。

本發明的檢測DBP的化學發光酶免疫檢測試劑盒含有盒體，設在盒體內的反應杯和設在盒體內的試劑。?具體含有以下成分：

反應杯為白色不透明的塑料反應微孔，固定于黑色外框支撐架上，放于自封袋內。

應用pH=7.4?0.05?mol/L的PBS溶液稀釋DBP純品得到的DBP系列標準品溶液，濃度范圍至少包含了0.02~1.62mg/L的濃度區間。

酶標抗原工作液。是由DBP與OVA偶合制成的偶聯物與辣根過氧化物酶反應獲得。

磁標抗體工作液。由DBP與BSA偶合制成的偶聯物作為免疫原免疫Balb/c小鼠制備獲得抗體后與免疫磁珠反應獲得。

化學發光發光底物液。發光底物液分為A、B液。A液為化學發光底物-魯米諾和發光增強劑-對甲苯酚溶液，B液為過氧化氫脲溶液。

濃縮樣品稀釋液。濃縮復溶液具體為2倍濃縮磷酸鹽緩沖液，使用前用雙蒸水稀釋至工作濃度后使用，用于樣品前處理。

濃縮洗滌液。濃縮洗滌溶液具體為含有吐溫-20（Tween-20）緩沖液的20倍濃縮磷酸鹽緩沖液，使用前用雙蒸水稀釋至工作濃度后使用，用于實驗過程中洗滌化學發光板。

本發明溶液的配制：

本發明試劑盒中涉及的DBP標準品溶液、抗體工作液、化學發光溶液及洗滌溶液及其配方對本發明試劑盒檢測的靈敏度影響很大；其中各溶液的主要成分及其配制方法是：

1、DBP標準溶液：以常規方法將DBP純品用0.05?mol/L，pH=7.4的PBS配制成濃度分別為0、0.02、0.06、0.18、0.54、1.62?mg/L的DBP標準溶液。

2、酶標抗原工作液：用DBP與OVA偶聯制備的偶聯物與辣根過氧化物酶偶聯制備得到。用pH7.6的磷酸鈉為0.01M、NaCl為0.25M的緩沖溶液稀釋至工作濃度。