[發明專利]一種從油菜葉中提取高純度SOD的方法

無效

• 申請號: 201210538476.1
• 申請日: 2012-12-13
• 公開（公告）號: CN103865894A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 畢玉軒
• 申請（專利權）人: 青島百草匯中草藥研究所
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.?一種從油菜葉中提取高純度SOD的方法，其特征在于，該方法通過以下工藝步驟：

A、取新鮮的油菜葉1重量份，加入2-3重量份50mmol/L的磷酸鉀緩沖液中，攪打勻漿，用100-120目篩抽濾，將濾液以3000-5000轉/分鐘，離心16-25分鐘獲得葉綠體；

B、將A步驟所得葉綠體用0.2-0.3重量份50mmol/L的磷酸鉀緩沖液沖洗兩次；放入5mmol/L的磷酸鉀緩沖液中，一邊攪拌一邊用超聲波進行粉碎處理，經離心機4000-6000轉/分鐘，離心20-30分鐘，獲得上清液即為粗酶液；

C、向B步驟所得粗酶液中加入硫酸銨，直至硫酸銨的飽和度達到50-60%，靜置2-4小時，經離心機4000-6000轉/分鐘，離心30-40分鐘，取上清液；

D、向C步驟所得上清液中加入硫酸銨至飽和濃度為93-97%，靜置2-4小時，經離心機4000-6000轉/分鐘，離心40-50分鐘，所得沉淀物即為粗制的SOD；

E、將D步驟所得的粗制SOD，加入3-5倍體積的5mmol/L的磷酸鉀緩沖液溶解并透析，將透析過的溶液通過低溫真空濃縮至原體積的1/3-1/4；

F、將E步驟所得濃縮液經Sephadex?G-75凝膠柱或DEAE-?Sephadex?A-50離子交換柱進行提純；凝膠柱的洗脫液為5mmol/L的磷酸鉀緩沖液溶；離子交換柱的洗脫液為5-300mmol/L的磷酸鉀緩沖液溶，進行梯度洗脫；

G、將F步驟所得洗脫液經低溫真空濃縮，然后冷凍干燥后即可獲得高純度的油菜葉綠體SOD。

2.?如權利要求1所述的一種從油菜葉中提取高純度SOD的方法，其特征在于，所述50mmol/L的磷酸鉀緩沖液，除含有磷酸鉀外，還含有1mmol/L的EDTA、0.4mmol/L的蔗糖、0.01%巰基乙醇，且緩沖液的pH值為7.9。

3.?如權利要求1所述的一種從油菜葉中提取高純度SOD的方法，其特征在于，所述5mmol/L的磷酸鉀緩沖液，除含有磷酸鉀外，還含有1mmol/L的巰基乙醇，且緩沖液的pH值為7.9。