[發明專利]抗Benzonase單克隆抗體、其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210537625.2
• 申請日: 2012-12-12
• 公開（公告）號: CN103012591A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 張濤;尹娟
• 申請（專利權）人: 武漢吉愛生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;G01N33/577
• 代理公司: 上海華工專利事務所 31104
• 代理人: 應云平

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及抗Benzonase單克隆抗體、其制備方法和應用。

背景技術

Benzonase是源于粘質沙雷氏菌（Serratia?marcescens）產生的核酸內切酶，能高效地降解所有形式的DNA和RNA（單鏈、雙鏈、線性、環狀）。結構上，該酶由兩個相同的亞基通過兩個二硫鍵連接而成，每個亞基有245個氨基酸，分子量～30kDa。Benzonase有效用于實驗室重組蛋白表達純化以及重組藥物制備過程中核酸的消化、去除。目前，Benzonase的檢測方法之一是利用Benzonase本身的水解活性進行間接進行，但如果Benzonase失去酶解能力就不能檢測出Benzonase；另外，可以通過ELISA方法檢測Benzonase的含量，但是這種方法使用的抗體是多抗，特異性較差，不能精確定量。

發明內容

本申請的發明人通過研究發現，以Benzonase蛋白作為免疫原或將Benzonase的氨基酸肽段與載體蛋白的偶聯物作為免疫原，能夠獲得靈敏、高效、特異的抗Benzonase單克隆抗體。

本發明的第一個目的在于提供抗Benzonase單克隆抗體的制備方法。

本發明的第二個目的在于提供根據所述方法制備得到的抗Benzonase單克隆抗體。

本發明的第三個目的在于提供所述抗Benzonase單克隆抗體的應用。

作為本發明的第一個方面，抗Benzonase單克隆抗體的制備方法，以Benzonase蛋白作為免疫原或將Benzonase的氨基酸肽段與載體蛋白的偶聯物作為免疫原獲得特異性的抗Benzonase單克隆抗體。進一步地，所述方法包括以下步驟：

A）將Benzonase蛋白或Benzonase的氨基酸肽段與載體蛋白的偶聯物作為免疫原免疫動物；

B）將被免疫動物的脾細胞和骨髓瘤細胞融合；

C）篩選融合的雜交瘤細胞，獲得特異性的抗Benzonase單克隆抗體。

其中，所述Benzonase蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，所述Benzonase的氨基酸肽段的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2、SEQ?ID?NO：3、SEQID?NO：4、SEQ?ID?NO：5、SEQ?ID?NO：6、SEQ?ID?NO：7中任一項所示。

其中，所述載體蛋白選自：KLH、BSA、OVA，優選為KLH。

其中，所述動物選自：小鼠、大鼠、兔子，優選為小鼠。

作為本發明的第二個方面，根據上述方法制備得到的抗Benzonase單克隆抗體。

作為本發明的第三個方面，所述抗Benzonase單克隆抗體在檢測Benzonase及其類似物中的應用。

本發明的單克隆抗體的有益效果：

1、以Benzonase蛋白或Benzonase的氨基酸肽段作為免疫原，所制備的抗體特異地識別核酸內切酶Benzonase及其類似物，能夠通過Western?Blotting?對Benzonase精確定量，并從分子量上作進一步地確認是否為Benzonase；

2、利用此抗體通過Western?Blotting可檢測出每毫升體系中低于1ng或1unit的Benzonase；

3、能夠檢測具有酶活或失活的Benzonase。

因此，根據本發明的方法獲得的抗Benzonase單克隆抗體特異性好、靈敏度高、適用范圍廣，可用于Benzonase及其類似物的檢測，具有良好的應用前景。

附圖說明

圖1為本發明篩選獲得的14株單克隆抗體與Benzonase的Western?Blotting?反應。

圖2為本發明制備的單克隆抗體與Benzonase的Western?Blotting反應，其中，泳道1-8對應的Benzonase濃度依次為10ng/ml、5ng/ml、2.5ng/ml、1.25ng/ml、0.625ng/ml、0.3125ng/ml、0.15625ng/ml、0.078125ng/ml。

具體實施方式

以下結合具體實施例，對本發明作進一步說明。應理解，以下實施例僅用于說明本發明而非用于限定本發明的范圍。

實施例1、抗Benzonase單克隆抗體的制備