[發(fā)明專利]冬蟲夏草dTMP激酶、編碼基因及其應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210536966.8
• 申請(qǐng)日: 2012-12-10
• 公開（公告）號(hào): CN103045556A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭裕國(guó);柳志強(qiáng);吳暉;李邦良;許靜;吳玲芳;許峰;薛亞平;袁水金;王鴻艷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué);杭州中美華東制藥有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/12
• 分類號(hào): C12N9/12;C12P19/30;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/645
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

（一）技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種來(lái)自“百令”生產(chǎn)菌冬蟲夏草中國(guó)被毛孢的參與脫氧嘧啶核苷酸出發(fā)合成代謝二磷酸脫氧嘧啶核苷的dTMP激酶（dTMP?kinase），以及編碼這個(gè)酶的基因及其應(yīng)用。

（二）背景技術(shù)

冬蟲夏草（Cordyceps?sinensis?(Berk.)?Sacc.）是冬蟲夏草菌寄生在鱗翅目（Lepidoptera）蝙蝠蛾科昆蟲（Hepialus?armoricanus?Oberthur）幼蟲上的子座及幼蟲尸體上的復(fù)合體（包括子座和蟲體）。冬蟲夏草是一類珍惜的傳統(tǒng)真菌藥材資源，具有代謝產(chǎn)物和生物活性多樣的特點(diǎn)，在生物醫(yī)藥領(lǐng)域展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用和發(fā)展前景。冬蟲夏草以其多種藥用功效廣泛、明顯而備受關(guān)注，在世界范圍內(nèi)備受推崇。中醫(yī)認(rèn)為，冬蟲夏草入肺腎二經(jīng)，既能補(bǔ)肺陰，又能補(bǔ)腎陽(yáng)，主治腎虛，陽(yáng)痿遺精，腰膝酸痛，病后虛弱，久咳虛弱，勞咳痰血，自汗盜汗等，是唯一的一種能同時(shí)平衡、調(diào)節(jié)陰陽(yáng)的中藥。現(xiàn)代藥理學(xué)已證實(shí)，冬蟲夏草具有免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、降血糖血脂、性激素樣作用等廣泛的生物活性。

冬蟲夏草菌是一種子囊菌，在其生活史中具有分生孢子階段（無(wú)性型）和子囊孢子階段（有性型）。而在人工培養(yǎng)、液體發(fā)酵等實(shí)際生產(chǎn)中使用的是無(wú)性階段的冬蟲夏草菌，因而冬蟲夏草無(wú)性型的鑒定非常重要。國(guó)內(nèi)外學(xué)者在冬蟲夏草資源調(diào)查、無(wú)性型確證、活性成分分離分析和作用機(jī)理、開發(fā)應(yīng)用方面做了大量工作。冬蟲夏草中國(guó)被毛孢已被證明是冬蟲夏草的無(wú)性型存在形式，具有與天然冬蟲夏草相同的活性成分和藥效。

天然蟲草具有嚴(yán)格的寄生性以及特殊的生態(tài)環(huán)境，故其產(chǎn)量很低，價(jià)格高昂。野生冬蟲夏草由于受生長(zhǎng)環(huán)境等因素制約，資源匱乏。由于近幾年在人工栽培上進(jìn)展不大，野生冬蟲夏草代用品研究多集中在液體發(fā)酵上。利用液體深層發(fā)酵培養(yǎng)冬蟲夏草菌絲體、提取物或發(fā)酵液,是解決冬蟲夏草藥源的一種有效途徑。蟲草發(fā)酵生產(chǎn)蟲草替代品，既可有效保護(hù)蟲草這一珍貴資源，又不受氣候、地理環(huán)境和蟲草寄生條件嚴(yán)格的限制，適合于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。生產(chǎn)出的替代品如菌絲體其成分和藥效也與天然蟲草相似，因而國(guó)內(nèi)外一直致力于蟲草菌絲體的發(fā)酵培養(yǎng)。人工發(fā)酵培養(yǎng)冬蟲夏草中國(guó)被毛孢得到的菌絲，經(jīng)毒理、藥理、植化研究，證明與天然蟲草化學(xué)組成、藥理作用基本一致，可代替天然蟲草生產(chǎn)蟲草制品，以彌補(bǔ)自然資源的短缺，通過(guò)對(duì)發(fā)酵條件的優(yōu)化，菌絲體生物量和代謝產(chǎn)物的量均有明顯提高。

近年來(lái)，隨著天然產(chǎn)物化學(xué)和現(xiàn)代色譜技術(shù)的飛速發(fā)展，在對(duì)蟲草產(chǎn)品研發(fā)中已逐步由蟲草原料或粗提物的直接利用轉(zhuǎn)向更深層次的功能性代謝產(chǎn)物研究。國(guó)內(nèi)外已對(duì)蟲草代謝產(chǎn)物做了大量的研究，代謝產(chǎn)物主要包括核苷、多糖、多肽、甾醇等幾大類化合物，其中嘌呤類核苷、蟲草多糖、甘露醇等具有代表性的功能性代謝產(chǎn)物在生物合成、藥理作用等方面的研究初見成效。

核苷類是蟲草最主要的活性物質(zhì)之一，其中二磷酸脫氧嘧啶核苷類核苷包括胞二磷酸脫氧嘧啶核苷核苷和尿二磷酸脫氧嘧啶核苷核苷。尿二磷酸脫氧嘧啶核苷核苷(uracil?riboside)又稱尿苷(uIidine)，別稱由雪核糖苷、二氫二磷酸脫氧嘧啶核苷核苷、1-β-D-喃核糖基尿二磷酸脫氧嘧啶核苷。胞二磷酸脫氧嘧啶核苷核苷(cytosine?riboside)又名胞苷(cytidine)、胞啶、1-β-D-呋喃核苷胞二磷酸脫氧嘧啶核苷。二磷酸脫氧嘧啶核苷核苷是多用途的核苷，可作為保健品和食品的添加劑。它作為美容和抗紫外輻射化妝品也逐漸成為人們生活的必需品，作為藥物，已臨床應(yīng)用于中樞神經(jīng)、泌尿、代謝和心血管等多方面的疾病，在美國(guó)，核酸類藥品近年來(lái)在抗病毒、抗腫瘤方面顯示了不可替代的作用。

由于嘧啶核苷及其類似物的重要生理作用，國(guó)內(nèi)外有關(guān)微生物生產(chǎn)嘧啶類核苷已有很多研究。然而作為重要合成代謝嘧啶類核苷的冬蟲夏草菌，還只停留在代謝產(chǎn)物成分分析和功效的研究上，對(duì)冬蟲夏草菌嘧啶類核苷合成代謝途徑中相關(guān)基因和蛋白的研究還很少見。

（三）發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于針對(duì)以上存在的不足和需要解決的技術(shù)問(wèn)題，對(duì)“百令”生產(chǎn)菌冬蟲夏草中國(guó)被毛孢合成代謝二磷酸脫氧嘧啶核苷的酶及其編碼基因進(jìn)行深入研究，提供了“百令”生產(chǎn)菌冬蟲夏草中國(guó)被毛孢參與脫氧嘧啶核苷酸出發(fā)合成代謝二磷酸脫氧嘧啶核苷的酶、編碼基因及其應(yīng)用。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：