[發明專利]一種基因逃逸的檢測方法無效

申請號：	201210535890.7	申請日：	2012-12-12
公開（公告）號：	CN103858684A	公開（公告）日：	2014-06-18
發明（設計）人：	盧寶榮;蔡星星;楊超	申請（專利權）人：	復旦大學
主分類號：	A01G7/00	分類號：	A01G7/00;A01G1/00
代理公司：	上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268	代理人：	吳桂琴
地址：	200433 ***	國省代碼：	上海;31
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種基因逃逸檢測方法
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【權利要求書】：

1.一種基因逃逸的檢測方法，其特征在于，通過比較分析雜草稻或野生稻群體的平均復合適合度值與栽培稻平均復合適合度值的差異，預測轉基因逃逸后帶來的環境風險及其程度，其包括步驟：

（1）構建栽培稻和雜草稻或栽培稻和野生稻的實驗群體；

（2）設計用于模擬抗蟲轉基因逃逸導致環境風險的田間種植實驗方案；

（3）建立利用選擇壓（放養靶標害蟲）計算適合度變化，模擬抗蟲轉基因逃逸帶來環境風險的檢測和評價標準。

2.按權利要求1所述的基因逃逸的檢測方法，其特征在于，所述步驟（1）的構建栽培稻和雜草稻或栽培稻和野生稻的實驗群體的步驟為：混合2-3個不同品種栽培稻的等量種子構成栽培稻的比較實驗群體，分別混合2-3個不同群體的雜草稻或野生稻等量種子或多年生野生稻植株，分別構建形成雜草稻或野生稻的實驗群體。

3.按權利要求1所述的基因逃逸的檢測方法，其特征在于，所述步驟（2）的用于模擬抗蟲轉基因逃逸導致環境風險的田間種植實驗，是將罩籠條件下未接種靶標害蟲的栽培稻和雜草稻或栽培稻和野生稻的實驗群體視為“含轉抗蟲基因的群體”，將接種靶標害蟲的栽培稻和雜草稻或栽培稻和野生稻實驗群體視為“非轉基因群體”；分別將兩套一致的栽培稻和雜草稻或栽培稻和野生稻的實驗群體樣本，隨機種植于未接種靶標害蟲和接種靶標害蟲的環境中，具體種植步驟為：

在罩籠條件下，將栽培稻和雜草稻或栽培稻和野生稻的實驗群體分小區種植，每個小區至少包含5×5=25個植株，栽培稻和雜草稻實驗群體的株距和行距設置為15cm×15cm～20cm×20cm之間；栽培稻和野生稻實驗群體的株距和行距設置為30cm×30cm～40cm×40cm之間；在同一實驗環境條件下，栽培稻和雜草稻或栽培稻和野生稻的實驗群體按照隨機分布種植于4-6個小區，并于實驗群體植株生活史的各生長階段，分別進行適合度相關性狀的測量。

4.按權利要求3所述的基因逃逸的檢測方法，其特征在于，所述步驟（2）中的同一實驗環境條件為無蟲壓或者高蟲壓。

5.按權利要求1所述的基因逃逸的檢測方法，其特征在于，所述步驟（3）的利用選擇壓是利用放養靶標害蟲。

6.按權利要求1所述的基因逃逸的檢測方法，其特征在于，所述步驟（3）中，建立依據平均復合適合度的計算值，評價靶標“抗蟲轉基因”逃逸到雜草稻或野生稻群體所帶來的環境風險指數（R），用%表示；

其中，平均復合適合度值（F）是基于各實驗小區的各形態性狀，如，萌發種子成苗率、單株分蘗數、單株穗數和單株種子數適合度的平均值來計算：

各形態性狀適合度值（F）為：[無蟲壓環境植株的測量值（M₀）－高蟲壓環境植株的測量值（M_h）]/無蟲壓環境植株的測量值（M₀）×100%；

F（%）=（M₀－M_h）/M₀×100%………………………………………(1)

栽培稻或野生近緣種的平均復合適合度值F_cv或F_w為4個性狀：萌發種子成苗率、單株分蘗數、單株穗數和單株種子數適合度值的平均數；

環境風險指數R（%）為：[栽培稻平均復合適合度值（F_cv）－野生近緣種平均復合適合度值（F_w）]/栽培稻平均復合適合度值（F_cv）×100%

R（%）=（F_cv－F_w）/F_cv×100%………………………………………(2)。

7.按權利要求6所述的基因逃逸的檢測方法，其特征在于，所述環境風險指數（R）值的變化在1～-∞之間，R數值越接近1，表明環境風險越小，R數值越小，表明環境風險越大。

8.按權利要求1所述的基因逃逸的檢測方法，其特征在于，所述步驟（2）中所述的田間種植實驗其步驟如下：，

罩籠條件為用紗網將無靶標害蟲的實驗田罩住，紗網孔眼大小以能完全擋住外界靶標害蟲進入實驗田為準，分別設置無蟲壓和高蟲壓環境；其中，高蟲壓環境是通過接種好放養靶標害蟲實現，接種靶標害蟲為>180頭/平米。