[發(fā)明專利]冬蟲夏草中國被毛孢氨甲酰磷酸合成酶、編碼基因及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210535384.8
• 申請日: 2012-12-10
• 公開（公告）號: CN103031281A
• 公開（公告）日: 2013-04-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭裕國;柳志強(qiáng);吳暉;李邦良;吳玲芳;許靜;許峰;薛亞平;袁水金;王鴻艷
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué);杭州中美華東制藥有限公司
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N15/52;C12N1/21;C12P13/00;C12R1/19
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

1.一種冬蟲夏草中國被毛孢氨甲酰磷酸合成酶，其特征在于所述酶具有SEQ?ID?No.1所示氨基酸序列90%以上的同源性。

2.如權(quán)利要求1所述冬蟲夏草中國被毛孢氨甲酰磷酸合成酶，其特征在于所述酶的氨基酸序列為SEQ?ID?No.1所示。

3.一種權(quán)利要求1所述冬蟲夏草中國被毛孢氨甲酰磷酸合成酶在生物催化L-谷氨酸制備氨甲酰磷酸中的應(yīng)用。

4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用為：以含冬蟲夏草中國被毛孢氨甲酰磷酸合成酶的菌體發(fā)酵培養(yǎng)后獲得的濕菌體進(jìn)行細(xì)胞破碎后制備的細(xì)胞破碎混合液為催化劑，以L-谷氨酸為底物，在ATP及碳酸氫鈉的作用下，于緩沖溶液的轉(zhuǎn)化體系中進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)，獲得氨甲酰磷酸。

5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用為：以含冬蟲夏草中國被毛孢氨甲酰磷酸合成酶的菌體發(fā)酵培養(yǎng)后獲得濕菌體進(jìn)行細(xì)胞破碎后制備的細(xì)胞破碎混合液為催化劑，以L-谷氨酸為底物，在ATP及碳酸氫鈉的作用下，于pH為6.5~8.5的緩沖溶液的轉(zhuǎn)化體系中，在30℃、150rpm條件下轉(zhuǎn)化反應(yīng)2~3h，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液過濾，取濾液即為含氨甲酰磷酸的粗品，所述粗品分離純化獲得氨甲酰磷酸。

6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述底物的初始濃度為10g/L，所述催化劑的體積用量為100mL/g底物，所述催化劑的干菌體濃度為6.7mg/mL，所述ATP、碳酸氫鈉與底物的質(zhì)量比為1:1:1。

7.一種編碼權(quán)利要求1所述酶的基因。

8.如權(quán)利要求7所述基因，其特征在于所述基因具有SEQ?ID?No.2所示核苷酸序列95%以上同源性。

9.如權(quán)利要求8所述基因，其特征在于所述基因的核苷酸序列為SEQ?ID?No.2所示。

10.如權(quán)利要求7~9之一所述基因在構(gòu)建能夠生物催化L-谷氨酸制備氨甲酰磷酸的基因工程菌中的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用為：構(gòu)建含有所述冬蟲夏草中國被毛孢氨甲酰磷酸合成酶基因的重組載體，將所述重組載體轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中，獲得的重組基因工程菌進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)液分離純化獲得含有冬蟲夏草中國被毛孢氨甲酰磷酸合成酶的菌體細(xì)胞。