[發(fā)明專利]治療和改善胰島素抵抗的仙鶴草活性組分及其應(yīng)用以及其提取方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210535219.2
• 申請日: 2012-12-12
• 公開（公告）號: CN103202897A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 祝連彩;王伯初;郭廷旺;周雪梅;譚君;劉曦
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶大學(xué)
• 主分類號: A61K36/73
• 分類號: A61K36/73;A61P5/50
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129
• 代理人: 謝殿武

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種仙鶴草的活性組分，特別涉及一種治療和改善胰島素抵抗的仙鶴草活性組分及其應(yīng)用以及其提取方法。?

背景技術(shù)

胰島素抵抗是指胰島素促進(jìn)葡萄糖攝取和利用的效率降低，表現(xiàn)為外周組織尤其是肌肉、脂肪組織對葡萄糖的利用障礙，自始至終貫穿于2型糖尿病發(fā)生、發(fā)展的全過程。特別是1995年Stern提出了聞名的“共同土壤”學(xué)說，豐富了IR的內(nèi)涵，即肥胖、高血壓、高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病、2型糖尿病、腦卒中等均具有共同的病理基礎(chǔ)——胰島素抵抗。目前臨床應(yīng)用于改善和治療胰島素抵抗的藥物主要是胰島素增敏劑噻唑烷二酮類藥物（TZDs）（如吡格列酮和羅格列酮），其通過激活PPARγ，進(jìn)一步選擇性的促進(jìn)下游基因的轉(zhuǎn)錄，可以募集前脂肪細(xì)胞，促進(jìn)其分化及在胞內(nèi)積聚更多的脂質(zhì)。所以此類藥物往往伴隨著體重增加，肥胖的副作用，也加重了心血管的危險(xiǎn)，同時(shí)低血糖、全身性浮腫、心臟負(fù)荷、骨質(zhì)疏松、癌癥等也是較明顯的副作用。因此，開發(fā)新型的PPAR激活劑則具有重要的經(jīng)濟(jì)和社會價(jià)值，而中藥具多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)、且相對安全特點(diǎn)，尋找和開發(fā)PPARγ的選擇性或不完全激活劑，可以在降低胰島素抵抗的同時(shí)，降低因脂肪過度積累而導(dǎo)致的心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)等副作用。調(diào)控前脂肪細(xì)胞分化的轉(zhuǎn)錄因子主要為：PPARγ、ADD1/SREBP-1和C/EBP-α。PPARγ可以調(diào)控C/EBP-α、脂質(zhì)代謝關(guān)鍵酶、脂肪分泌蛋白、脂肪活性因子的表達(dá)從而參與脂肪細(xì)胞分化進(jìn)程。AP2可調(diào)控細(xì)胞內(nèi)脂肪酸的轉(zhuǎn)運(yùn)和合成，是外周胰島素敏感和糖脂代謝的關(guān)鍵調(diào)節(jié)器。PPARγ是AP2基因表達(dá)的重要調(diào)節(jié)因子，通過調(diào)節(jié)其基因啟動(dòng)子中的PPAR反應(yīng)元件（PPRE），增加脂肪細(xì)胞中AP2的表達(dá)，從而促進(jìn)脂肪細(xì)胞的分化，但同時(shí)增加了胞內(nèi)脂質(zhì)的累積。因此AP2過量表達(dá)，可造成正常的脂肪代謝平衡的紊亂。?研究表明，使用AP2的抑制劑和PPARγ的激動(dòng)劑均可以使外周胰島素增敏。?

仙鶴草為薔薇科多年生草本植物龍牙草（Agrimonia?Pilosa?Ledeb）的全草，中醫(yī)主要用于治療治咯血、吐血、便血，崩漏帶下，勞傷脫力，癰腫，創(chuàng)傷出血等。目前對仙鶴草的化學(xué)成分的研究表明，其含有多酚、黃酮及黃酮糖苷類化合物、三萜類化合物和仙鶴草內(nèi)酯等。而目前尚未有仙鶴草活性組分用于治療和改善胰島素抵抗的報(bào)道。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明主要針對仙鶴草活性組分對胰島素抵抗的干預(yù)，發(fā)現(xiàn)仙鶴草活性組分不僅對PPARγ的激活作用與陽性對照藥物吡格列酮無顯著差異，可顯著促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的分化；而且在激活PPARγ表達(dá)的同時(shí)不像陽性對照藥物吡格列酮樣誘導(dǎo)AP2的過度表達(dá)，表明仙鶴草活性組分具有改善和治療胰島素抵抗的作用。?

本發(fā)明的一種治療和改善胰島素抵抗的仙鶴草活性組分，該活性組分包括仙鶴草中黃酮組分或仙鶴草三萜組分或仙鶴草黃酮組分和仙鶴草三萜組分的組合物。?

進(jìn)一步，所述黃酮組分及三萜組分的組合物中黃酮組分與三萜組分的質(zhì)量比為4:11∶4。?

進(jìn)一步，所述仙鶴草黃酮組分與仙鶴草三萜組分的質(zhì)量比為4:1；?

進(jìn)一步，所述仙鶴草黃酮組分總黃酮的質(zhì)量百分比含量不低于30%，仙鶴草三萜組分總?cè)频馁|(zhì)量百分比含量不低于40%；?

進(jìn)一步，所述仙鶴草為薔薇科龍牙草屬植物，包括牙草、黃龍尾、疏毛龍牙草、東北朝鮮龍牙草、東北的鈍齒龍、東北大興安嶺的多齒龍牙草、小花龍牙草、大花龍牙草、托葉龍牙草和歐洲的龍牙草。?

本發(fā)明還公開一種治療和改善胰島素抵抗的仙鶴草活性組分在制備治療和改善胰島素抵抗藥物中的應(yīng)用。?

本發(fā)明還公開一種治療和改善胰島素抵抗的仙鶴草活性組分的提取方法，其特征在于：包括以下步驟：?

a.取仙鶴草全草在溫度為105-115℃下干燥至恒重并粉碎至35-45目，然后加入95%乙醇在溫度為85-95℃回流提取3次后過濾，每次提取2小時(shí)，濾過，收集濾液和濾渣，將收集的濾液減壓濃縮制得浸膏；?

b.將步驟a中的浸膏用95%乙醇分散溶解后加入10%浸膏重量的活性炭回流2小時(shí)后過濾并收集濾液，將所收集的濾液濃縮后以樣品：硅膠=1：30上硅膠柱，依次用乙酸乙酯:石油醚=1:1，乙酸乙酯:石油醚=5:1及純乙酸乙酯洗脫，各洗脫5個(gè)柱體積，分別收集得洗脫液（Ⅰ），洗脫液（Ⅱ），洗脫液（Ⅲ）；?

c.將洗脫液（Ⅱ）和洗脫液（Ⅲ）溶于體積比為氯仿：甲醇=1:1的混合液，上LH-20凝膠柱，經(jīng)薄層層析法檢測分析，得到仙鶴草三萜組分和黃酮組分；?