[發明專利]msCT-rhLeptin融合蛋白轉基因工程菌株

無效

• 申請號: 201210534879.9
• 申請日: 2012-12-12
• 公開（公告）號: CN102965327A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 余瓊
• 申請（專利權）人: 黑龍江大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12R1/19
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種融合蛋白轉基因工程菌株。

背景技術

老年人骨質疏松發病率較高，全球有2億骨質疏松患者，并且女性多于男性。根據世界衛生組織（WHO）的標準，美國國家健康和營養調查（NHANES?Ⅲ，1988~1994年）結果表明，骨質疏松嚴重影響老年人生活質量，50歲以上人群中，1/2的女性、1/5的男性在他們的一生中都會出現骨質疏松性骨折，一旦患者經歷了第一次骨質疏松性骨折，繼發性骨折的危險明顯加大。中國老年人居于世界首位，現有骨質疏松癥患者9000萬，占總人口的7.1%。隨著社會老齡化的進程，骨質疏松癥的發病率呈上升趨勢，預計到2050?年將增加到2.21億，那時全世界一半以上的骨質疏松性骨折將發生在亞洲，絕大部分在中國。有學者對1995~1996年美國骨質疏松、心肌梗死、卒中和乳腺癌的年發生數進行調查顯示，每年發生骨質疏松性骨折150萬次，其中椎體骨折70萬次，腕部骨折20萬次，髖部骨折30萬次，其它骨折30萬次。

肥胖與骨量關系臨床觀察表明，肥胖與骨密度(BMD)提高有關。肥胖是骨量的保護因素，超重和肥胖的婦女絕經后較同齡非超重婦女骨量高且骨丟失較慢。體重下降是絕經早期骨丟失的危險因素，提高體重指數可減緩絕經后骨丟失。但肥胖也常常引發高血糖、高血壓、高血脂、高血粘、高尿酸、高胰島素血癥、冠心病、腦卒中、下肢靜脈曲張、脂肪肝、膽石癥、睡眠呼吸暫停癥、糖尿病、痛風癥及關節炎，是很多疾病的誘因之一。

發明內容

本發明要解決目前尚無同時有效治療骨質疏松和肥胖藥品的缺陷，而提供的一種msCT-rhLeptin融合蛋白轉基因工程菌株。

msCT-rhLeptin融合蛋白轉基因工程菌株名為大腸桿菌BL21（DE3-msCT/Obese’），大腸桿菌BL21（DE3-msCT/Obese’）按以下步驟制備：

一、將含有msCT-rhLeptin融合蛋白基因的質粒載體pUC（msCT/Obese’）用BamH?I和EcoRⅠ雙酶切，獲得msCT-rhLeptin融合蛋白的DAN片段；

二、用BamHI和EcoRⅠ雙酶切質粒pGEX-6P-1；

三、msCT-rhLeptin融合蛋白的DAN片段與經過雙酶切的載體pGEX-6P-1進行酶連接，然后16℃放置連接過夜，得到載體pGEX-msCT/Obese’；

四、用載體pGEX-msCT/Obese’轉化大腸桿菌BL21（DE3），選擇陽性重組子，即獲得msCT-rhLeptin融合蛋白轉基因工程菌大腸桿菌BL21（DE3-msCT/Obese’）。

本發明中msCT-rhLeptin融合蛋白的基因序列如SEQ?ID?NO：1所示。

本發明中msCT-rhLeptin融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

本發明msCT-rhLeptin融合蛋白采用人為改造的Leptin和鮭魚降鈣素基因編碼翻譯而成。具有降低使用者體重，并防治骨質疏松的效果。

本發明用于治骨質疏松和肥胖的msCT-rhLeptin融合蛋白微生物制劑，不產生拮抗反應，使用安全。

本發明msCT-rhLeptin融合蛋白轉基因工程菌大腸桿菌BL21（DE3-msCT/Obese’）發酵產生的msCT-rhLeptin融合蛋白共70個氨基酸。本發明采用生物基因工程手段獲得大腸桿菌BL21（DE3-msCT/Obese’）。采用本發明基因工程菌大腸桿菌BL21（DE3-msCT/Obese’）可大規模發酵生產msCT-rhLeptin融合蛋白，具有廣泛應用前景。本發明為治療骨質疏松和肥胖奠定了物質基礎。

具體實施方式

本發明技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式，還包括各具體實施方式間的任意組合。

具體實施方式一：本實施方式msCT-rhLeptin融合蛋白轉基因工程菌株名為大腸桿菌BL21（DE3-msCT/Obese’），大腸桿菌BL21（DE3-msCT/Obese’）按以下步驟制備：

一、將含有msCT-rhLeptin融合蛋白基因的質粒載體pUC（msCT/Obese’）用BamH?I和EcoRⅠ雙酶切，獲得msCT-rhLeptin融合蛋白的DAN片段（msCT/Obese’）；

二、用BamHI和EcoRⅠ雙酶切質粒pGEX-6P-1；