[發(fā)明專利]msCT-rhLeptin融合蛋白轉(zhuǎn)基因工程菌株

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210534879.9
• 申請(qǐng)日: 2012-12-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102965327A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 余瓊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 黑龍江大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/70;C12R1/19
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種融合蛋白轉(zhuǎn)基因工程菌株。

背景技術(shù)

老年人骨質(zhì)疏松發(fā)病率較高，全球有2億骨質(zhì)疏松患者，并且女性多于男性。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）的標(biāo)準(zhǔn)，美國(guó)國(guó)家健康和營(yíng)養(yǎng)調(diào)查（NHANES?Ⅲ，1988~1994年）結(jié)果表明，骨質(zhì)疏松嚴(yán)重影響老年人生活質(zhì)量，50歲以上人群中，1/2的女性、1/5的男性在他們的一生中都會(huì)出現(xiàn)骨質(zhì)疏松性骨折，一旦患者經(jīng)歷了第一次骨質(zhì)疏松性骨折，繼發(fā)性骨折的危險(xiǎn)明顯加大。中國(guó)老年人居于世界首位，現(xiàn)有骨質(zhì)疏松癥患者9000萬(wàn)，占總?cè)丝诘?.1%。隨著社會(huì)老齡化的進(jìn)程，骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，預(yù)計(jì)到2050?年將增加到2.21億，那時(shí)全世界一半以上的骨質(zhì)疏松性骨折將發(fā)生在亞洲，絕大部分在中國(guó)。有學(xué)者對(duì)1995~1996年美國(guó)骨質(zhì)疏松、心肌梗死、卒中和乳腺癌的年發(fā)生數(shù)進(jìn)行調(diào)查顯示，每年發(fā)生骨質(zhì)疏松性骨折150萬(wàn)次，其中椎體骨折70萬(wàn)次，腕部骨折20萬(wàn)次，髖部骨折30萬(wàn)次，其它骨折30萬(wàn)次。

肥胖與骨量關(guān)系臨床觀察表明，肥胖與骨密度(BMD)提高有關(guān)。肥胖是骨量的保護(hù)因素，超重和肥胖的婦女絕經(jīng)后較同齡非超重婦女骨量高且骨丟失較慢。體重下降是絕經(jīng)早期骨丟失的危險(xiǎn)因素，提高體重指數(shù)可減緩絕經(jīng)后骨丟失。但肥胖也常常引發(fā)高血糖、高血壓、高血脂、高血粘、高尿酸、高胰島素血癥、冠心病、腦卒中、下肢靜脈曲張、脂肪肝、膽石癥、睡眠呼吸暫停癥、糖尿病、痛風(fēng)癥及關(guān)節(jié)炎，是很多疾病的誘因之一。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決目前尚無(wú)同時(shí)有效治療骨質(zhì)疏松和肥胖藥品的缺陷，而提供的一種msCT-rhLeptin融合蛋白轉(zhuǎn)基因工程菌株。

msCT-rhLeptin融合蛋白轉(zhuǎn)基因工程菌株名為大腸桿菌BL21（DE3-msCT/Obese’），大腸桿菌BL21（DE3-msCT/Obese’）按以下步驟制備：

一、將含有msCT-rhLeptin融合蛋白基因的質(zhì)粒載體pUC（msCT/Obese’）用BamH?I和EcoRⅠ雙酶切，獲得msCT-rhLeptin融合蛋白的DAN片段；

二、用BamHI和EcoRⅠ雙酶切質(zhì)粒pGEX-6P-1；

三、msCT-rhLeptin融合蛋白的DAN片段與經(jīng)過(guò)雙酶切的載體pGEX-6P-1進(jìn)行酶連接，然后16℃放置連接過(guò)夜，得到載體pGEX-msCT/Obese’；

四、用載體pGEX-msCT/Obese’轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3），選擇陽(yáng)性重組子，即獲得msCT-rhLeptin融合蛋白轉(zhuǎn)基因工程菌大腸桿菌BL21（DE3-msCT/Obese’）。

本發(fā)明中msCT-rhLeptin融合蛋白的基因序列如SEQ?ID?NO：1所示。

本發(fā)明中msCT-rhLeptin融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

本發(fā)明msCT-rhLeptin融合蛋白采用人為改造的Leptin和鮭魚(yú)降鈣素基因編碼翻譯而成。具有降低使用者體重，并防治骨質(zhì)疏松的效果。

本發(fā)明用于治骨質(zhì)疏松和肥胖的msCT-rhLeptin融合蛋白微生物制劑，不產(chǎn)生拮抗反應(yīng)，使用安全。

本發(fā)明msCT-rhLeptin融合蛋白轉(zhuǎn)基因工程菌大腸桿菌BL21（DE3-msCT/Obese’）發(fā)酵產(chǎn)生的msCT-rhLeptin融合蛋白共70個(gè)氨基酸。本發(fā)明采用生物基因工程手段獲得大腸桿菌BL21（DE3-msCT/Obese’）。采用本發(fā)明基因工程菌大腸桿菌BL21（DE3-msCT/Obese’）可大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)msCT-rhLeptin融合蛋白，具有廣泛應(yīng)用前景。本發(fā)明為治療骨質(zhì)疏松和肥胖奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式，還包括各具體實(shí)施方式間的任意組合。

具體實(shí)施方式一：本實(shí)施方式msCT-rhLeptin融合蛋白轉(zhuǎn)基因工程菌株名為大腸桿菌BL21（DE3-msCT/Obese’），大腸桿菌BL21（DE3-msCT/Obese’）按以下步驟制備：

一、將含有msCT-rhLeptin融合蛋白基因的質(zhì)粒載體pUC（msCT/Obese’）用BamH?I和EcoRⅠ雙酶切，獲得msCT-rhLeptin融合蛋白的DAN片段（msCT/Obese’）；

二、用BamHI和EcoRⅠ雙酶切質(zhì)粒pGEX-6P-1；