[發明專利]一種基于枝干滴注技術簡捷高效誘導棗樹2n花粉的方法

無效

• 申請號: 201210534328.2
• 申請日: 2012-12-12
• 公開（公告）號: CN102972288A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發明（設計）人: 劉孟軍;劉平;李嬌
• 申請（專利權）人: 河北農業大學
• 主分類號: A01H1/08
• 分類號: A01H1/08
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種基于枝干滴注技術簡捷高效誘導棗樹2n花粉的方法。

背景技術

棗樹（Ziziphus?jujuba?Mill.）為我國第一大干果樹種，近年來發展迅速。為適應棗產業的快速發展，新品種選育工作迫在眉睫。由于棗花小、去雄難度大，加之胚高度敗育，棗樹雜交育種舉步維艱，倍性育種已經成為培育棗新品種的重要途徑之一。

通過無性多倍化獲得的多倍體，由于沒有外來優異基因的滲入，不能實現優異基因的重組，迫切需要通過有性多倍化途徑開展棗樹的倍性育種。

2n花粉（又稱巨型花粉）在有性倍性育種中具有重要價值。據本專利發明人檢測，在自然條件下，絕大多數棗樹優良品種的2n花粉自然發生比例極低，僅有1.79%的棗樹品種可以產生1%以上的2n花粉，最高達9.41%，絕大多數優良品種的2n花粉自然發生比例極低，不能滿足倍性育種需要。因此，對棗樹優良品種進行2n花粉誘導，進而通過有性雜交整合優良性狀，進行有性多倍體育種，具有重要的價值。本專利發明人曾嘗試利用涂抹法、微創法進行巨型花粉的誘導，其中涂抹法費時費力，效率很低；微創法誘導2n花粉的比例可以達到18.3%，但由于微創法是對較細的單個棗吊進行割傷處理，也比較費工，誘導效率仍然不能滿足大規模育種實踐的需要。本發明專利采用枝干滴注技術，使誘變劑通過枝干進入棗吊中，誘導時期容易掌握，由于在一個樹干處滴注可以影響其上幾十甚至幾百個棗吊，從而可以實現在1天內對大量棗吊進行2n花粉誘導，并且可以獲得高比例的2n花粉，大大提高了2n花粉的誘導效率，對加速棗樹有性多倍化育種進程具有重要價值。

發明內容

本發明建立了一種基于枝干滴注技術簡潔高效誘導棗樹2n花粉的方法。?

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：于棗花粉母細胞旺盛減數分裂期，以秋水仙素為誘變劑，利用鉆孔器對棗樹枝干基部進行打孔，然后采用輸液的方式將秋水仙素藥液直接滴注到枝干中，使藥液通過木質部向上運輸，阻止花粉母細胞減數分裂過程中紡錘絲的形成，誘導花粉染色體加倍，從而獲得2n花粉。

本發明的具體內容，即利用枝干滴注技術簡捷高效誘導棗樹2n花粉的具體方法如下：

（1）枝干預處理??于盛花前18-24d，選擇生長健壯的枝干，在枝干光滑部位用鉆孔器打直徑3mm的孔洞，深達木質部，但避免接觸到髓；

（2）2n花粉的誘導??首先用牛皮紙將輸液瓶和輸液管包嚴；然后將0.3%的秋水仙素溶液裝入輸液瓶中，秋水仙素溶液用量根據滴注部位以上的棗吊數量和長度來定，平均每棗吊用秋水仙素溶液0.5-0.8ml；之后迅速將輸液器針頭插入枝干孔洞中，用保鮮膜將針頭固定在孔中，調整流速，防止藥液外流；待秋水仙素溶液全部滴入枝干后，撤去輸液器；

（3）花粉的采集和觀測??到蕾裂期，采集枝干處理部位以上的花蕾，于室內用解剖針快速剝取成熟花粉，置于載玻片上，滴加0.5%氯化三苯基四氮唑染色液，室溫下遮光放置1h后，鏡檢2n花粉比例及活力。

本發明專利的有益效果是，通過枝干滴注秋水仙素，可高效誘導獲得高比例的2n花粉，直接用于授粉，可大幅度提高雜交后代中三倍體的出現幾率。該技術應用于棗樹2n花粉誘導，方法簡單便捷，誘導效率顯著提高。

附圖說明

圖1??誘導獲得的高活力2n花粉（染成紅色的巨型花粉）。

具體實施方式

以二倍體棗優良品種‘蜂蜜罐’和二倍體酸棗類型‘邢0604’為試材，于2012年5月7日選擇生長健壯的枝干，在枝干的光滑部位打直徑為3mm的孔洞，深達木質部；用牛皮紙將輸液瓶和輸液管包嚴后，將0.3%的秋水仙素溶液裝入輸液瓶中，滴注部位以上的棗吊平均每個用秋水仙素溶液0.5-0.8ml；之后迅速將輸液器針頭插入枝干孔洞中，用保鮮膜將針頭固定好，調整流速，并確保藥液不外流；待秋水仙素溶液全部滴入枝干后，撤去輸液器，以滴注蒸餾水為對照；于5月25日-5月30日，采集滴注處理部位以上處于蕾裂期的花蕾，于室內用解剖針快速剝取成熟花粉，置于載玻片上，滴加0.5%氯化三苯基四氮唑染色液，室溫下遮光放置1h后鏡檢；平均2n花粉比例分別達23.4%和20.3%，最高分別達31.8%和23.0%，所獲2n花粉的活力分別為80%和85%，而對照的平均2n花粉比例分別為0和3%，后者2n花粉活力為85%。