[發明專利]一種WFDC-2基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用

無效

• 申請號: 201210534157.3
• 申請日: 2012-12-12
• 公開（公告）號: CN102965449A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 張玉麗;裘建英;張云福;裘霖
• 申請（專利權）人: 芮屈生物技術（上海）有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海翼勝專利商標事務所(普通合伙) 31218
• 代理人: 翟羽;施春花

技術領域

本發明涉及一種試劑盒，具體地說關于一種WFDC-2基因的原位雜交檢測試劑盒及其檢測方法和應用。

背景技術

卵巢癌是女性生殖器官常見的腫瘤之一，發病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌而列居第三位。但因卵巢癌致死者，卻占各類婦科腫瘤的首位，對婦女生命造成嚴重威脅。由于卵巢的胚胎發育，組織解剖及內分泌功能較復雜它所患的腫瘤可能是良性或惡性。因卵巢癌臨床早期無癥狀，鑒別其組織類型及良惡性相當困難，其發病隱匿，約75%的患者就診時已為中晚期，預后較差，其病死率居婦科惡性腫瘤之首。由于缺乏特異性臨床癥狀，僅有19%的卵巢癌患者是在腫瘤外侵前得到診斷及有效治療。在過去20年間，雖然卵巢癌的治療手段取得了進步，卻未明顯提高卵巢癌的治愈率，卵巢癌行剖腹探查術中發現腫瘤局限于卵巢的僅占30％，大多數已擴散到子宮雙側附件，大網膜及盆腔各器官，所以卵巢癌無論在診斷和治療上確是一大難題，多年來專家們對卵巢惡性腫瘤的病理形態，臨床發生發展規律及治療方案進行了許多的探討，積累了大量的經驗到目前為止，就國內外臨床資料統計，其五年生存率僅25％～30％，主要原因是晚期發現，晚期治療。考慮到卵巢癌早期與晚期治療預后的差異，尋找一個能夠在早期發現卵巢癌的診斷方法具有重要的臨床意義，特別是癌變前期的篩查標志物臨床意義更大，這樣就可能做到預防性早期篩查和治療，降低卵巢癌的發病率和死亡率。

　　目前實驗室診斷卵巢癌的常用標志物為CA125，其在卵巢癌診斷中有較好臨床意義，但同時也存在一些不足,一旦發現CA125升高，腫瘤已經形成了，而且大部分都轉移了。

　　近年來學者們還發現了其他卵巢癌標志物，其中WFDC-2（人附睪蛋白4），由柯克霍弗（Kirchhoff）等于1990年通過cDNA篩檢在附睪組織中發現，包含2個保守的乳酸蛋白基團。對該基因的氨基酸序列分析后發現，其具有大序列的奇數半胱氨酸片段，這也預示該基因可能與蛋白間的相互作用有重要聯系，基因位于人基因組染色體20q12-13.1。通過微陣列及基因表達水平證實，WFDC-2基因在卵巢癌組織中過表達，在正常組織中表達正常，因此，該基因可能為診斷卵巢癌的潛在標志物。本發明人在研究中發現癌癥的臨床診斷和治療都太晚了，這是導致癌癥死亡率高的關鍵原因，要改變這種狀況，必須做到癌變前期的篩查和治療，不要等到腫瘤形成后或轉移后再檢查和治療，做到預防性診治-基因水平治未病。

　　為了驗證WFDC-2篩查早期卵巢癌的價值，本發明特別設計了卵巢癌患者、卵巢良性腫瘤、正常對照組，觀察WFDC-2基因mRNA表達情況，見圖2、3、4。同時發現，WFDC-2基因mRNA不僅可用于卵巢癌的早期診斷與鑒別，也可作為卵巢癌患者預后標志物，這對卵巢癌患者術后選擇積極的治療方式，實現個體化治療，最終提高卵巢癌患者生存率具有重要價值。

???隨著分子生物技術日益完善，功能基因組學，癌癥基因組學等研究的深入展開，至今，我們已有可能在基因水平上做更精確的早期診斷，在癌變前期或癌細胞形成（單克隆時）就能做到早期預測診斷。WFDC-2基因的mRNA篩查技術比檢查WFDC-2蛋白要準確的多，發明人在研究中用雙標記技術發現mRNA和蛋白的表達有時候不同步，有的蛋白就不表達，所以，采用mRNA技術比較可靠。本發明人查閱相關文獻至今沒有WFDC-2基因的mRNA水平癌變前期篩查試劑盒報道，也沒有采用原位雜交技術的檢測方法。

????原位雜交技術（in?situ?hybridization）是將分子生物學與細胞化學技術結合起來，以標記的核酸分子為探針，在組織細胞原位檢測特異性核酸分子的技術。其原理是使含有特異序列、經過標記的核酸單鏈（即探針），在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發生雜交，再以放射自顯影或免疫細胞化學方法對標記探針進行探測，從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種WFDC-2基因的原位雜交檢測試劑盒的用途。

本發明的再一的目的是，提供一種WFDC-2基因的原位雜交檢測試劑盒。

本發明的另一的目的是，提供一種WFDC-2基因的原位雜交檢測方法。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：

一種原位雜交檢測試劑盒，包括雜交探針和標記物，所述的雜交探針為序列表SEQ?ID?NO.1所示序列，是WFDC-2基因CDS中（38…412bp）,探針長375bp，與體內的靶片段進行反向互補雜交。WFDC-2基因為序列表SEQ?ID?NO.2所示序列，全長486bp，位于染色體20q12-q13”上。