[發明專利]糖尿病病理演變前期SFRP4基因的mRNA水平原位雜交檢測試劑盒及檢測方法和應用

在審

• 申請號: 201210534151.6
• 申請日: 2012-12-12
• 公開（公告）號: CN102965448A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 張玉麗;裘建英;張云福;裘霖
• 申請（專利權）人: 芮屈生物技術（上海）有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海翼勝專利商標事務所(普通合伙) 31218
• 代理人: 翟羽;施春花

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，更具體地說，是涉及與糖尿病病理演變mRNA表達改變(病理演變過程)的相關檢測技術。??

背景技術

???2011年統計的最新數據顯示全國已經確診的糖尿病有9240萬，糖尿病前期的人群有1.48億。糖尿病并發癥是一種常見的慢性并發癥，是由糖尿病病變轉變而來，后果相當嚴重，如足?。ㄗ悴繅木摇⒔刂?、腎?。I功能衰竭、尿毒癥）、眼病（模糊不清、失明）、腦?。X血管病變）、心臟病、皮膚病、性病等是糖尿病最常見的并發癥，是導致糖尿病患者死亡的主要因素。糖尿病的病理生理變化是由于胰島素分泌不足和組織糖利用障礙，導致血糖過高代謝障礙。糖尿病有原發性與繼發性兩種。原發性病因尚未清楚;，可能與遺傳等因素有關，繼發性見于慢性胰腺炎、癌癥、血色病、胰大部分手術切除、腦垂體前葉機能亢進、促腎上腺皮質機能亢進、腎上腺嗜鉻細胞瘤、胰島α細胞瘤、妊娠糖尿病等。近來科學家們都把糖尿病的發病機制的放在基因病理生理學水平進行深入研究，發現了一些與糖尿病發病有關一些基因，如SFRP4基因是近來發現，SFRP4是在機體炎癥過程中起作用的分子，這是人們首次將其與二型糖尿病患病風險聯系起來，SFRP4基因屬編碼分泌型卷曲相關蛋白4。?SFRP4的表達與炎癥標志物，其胰島釋放白細胞介素-1β刺激。全身SFRP4升高引起糖耐量降低，通過減少胰島細胞表達的Ca（2?+）通道，并抑制胰島素胞吐作用，SFRP4從而提供了胰島炎癥和胰島素分泌受損之間的聯系。此外，增加血清中的蛋白質被從T2D患者幾年前診斷，這表明SFRP4?T2D胰島功能障礙可能是一個潛在的生物標志物。研究人員對糖尿病患者與非糖尿病患者的beta細胞（負責生產胰島素的細胞）進行了比較，發現SFRP4蛋白在糖尿病患者體內的水平明顯較高，發現血液中SFRP4蛋白水平高于平均值的人，在未來幾年患糖尿病的可能性比SFRP4低于平均水平的人高五倍。這也是首次證明beta細胞中的炎癥與糖尿病有關，研究人員指出慢性低度炎癥削弱了beta細胞，使它們不再能夠生產足量的胰島素。無疑，有多種因素參與了這一削弱過程，而SFRP4蛋白就是其中之一。?研究人員每隔三年對上述非糖尿病患者血液中的SFRP4蛋白水平進行檢測，這樣的檢測總共進行了三次。研究顯示，血液中SFRP4高于平均水平的人中有37%在研究期間患上了糖尿病。而那些血液中SFRP4低于平均水平的人中，只有9%在研究期間患糖尿病。表明SFRP4蛋白可作為糖尿病的有力風險指標，有望將診斷時間提前數年。研究人員還解析了SFRP4損害胰島素分泌的機制，指出SFRP4水平升高會減少鈣離子通道在胰島的表達并抑制胰島素分泌，導致葡萄糖耐量減低。該蛋白標志不僅能指示糖尿病的患病風險，還能夠反映疾病的進程。研究顯示，這一指標獨立于其他已知二型糖尿病風險因子，例如肥胖和年齡等等。研究人員認為這一指標可以通過簡單的血液測試，指示正常體重的中年人患糖尿病的風險。這將給他們更強的動力來盡早改善生活方式，以預防糖尿病。此外，該研究也有助于人們開發治療二型糖尿病的新方法，即阻斷beta細胞中的SFRP4蛋白以減少炎癥從而保護細胞。臨床上當患者被確診為二型糖尿病時，往往這一疾病早已在患者體內發展了多年，而且已經對血管和眼部造成了傷害，及早篩查出糖尿病的早期風險是很有價值的，這樣人們就可以盡早采取預防性療法。

???本發明人在長期研究中發現，導致重大疾病死亡率不降的重要原因是不能做到真正的早期診治。因此，開發出用于糖尿病發病前期的相關基因水平篩查試劑盒有非常大的臨床價值。

?隨著分子生物技術日益完善，功能基因組學，疾病基因組學等研究的深入展開，為了尋求更早期的診斷糖尿病、治療糖尿病、以及預防糖尿病，已取得長足進步。至今，我們已有可能在基因的一級轉錄功能產物mRNA水平上做更精確的早期篩查和診斷，在糖尿病前期做預測和篩查，這樣就能將糖尿病的發病率降下來，可以大大降低社會成本，進一步提高國民的健康體質。

發明人在研究中發現用雙標記技術，同步檢測蛋白質與檢測mRNA，有時候mRNA有表達，但蛋白質有時候沒有轉錄出來，它們有時候存在表達時空不對應現象，才檢測mRNA更準確。

本發明人在研究中發現SFRP4基因在糖尿病患者、高危人群、正常對照人有明顯的表達量變化，將SFRP4作為篩查糖尿病病變前期有非常重要的臨床意義。