[發明專利]糖尿病病理演變前期PTPRD基因的mRNA水平原位雜交檢測試劑盒及檢測方法和應用

無效

• 申請號: 201210533912.6
• 申請日: 2012-12-12
• 公開（公告）號: CN102943121A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發明（設計）人: 裘霖;張玉麗;裘建英;張云福
• 申請（專利權）人: 芮屈生物技術（上海）有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海翼勝專利商標事務所(普通合伙) 31218
• 代理人: 翟羽;施春花

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，更具體地說，是涉及與糖尿病病理演變mRNA表達改變(病理演變過程)的相關檢測技術。?

背景技術

???2011年統計的最新數據顯示全國已經確診的糖尿病有9240萬，糖尿病前期的人群有1.48億。糖尿病并發癥是一種常見的慢性并發癥，是由糖尿病病變轉變而來，后果相當嚴重，如足?。ㄗ悴繅木摇⒔刂⒛I病（腎功能衰竭、尿毒癥）、眼?。：磺?、失明）、腦?。X血管病變）、心臟病、皮膚病、性病等是糖尿病最常見的并發癥，是導致糖尿病患者死亡的主要因素。糖尿病的病理生理變化是由于胰島素分泌不足和組織糖利用障礙，導致血糖過高代謝障礙。糖尿病有原發性與繼發性兩種。原發性病因尚未清楚;，可能與遺傳等因素有關，繼發性見于慢性胰腺炎、癌癥、血色病、胰大部分手術切除、腦垂體前葉機能亢進、促腎上腺皮質機能亢進、腎上腺嗜鉻細胞瘤、胰島α細胞瘤、妊娠糖尿病等。近來科學家們都把糖尿病的發病機制的放在基因病理生理學水平進行深入研究，發現了一些與糖尿病發病有關一些基因，如PTPRD基因是近來發現與漢族人患糖尿病有關，發現PTPRD蛋白在糖尿病患者體內的水平明顯增高，研究人員認為這一指標可以通過簡單的血液測試，指示正常體重的中年人患糖尿病的風險。這將給他們更強的動力來盡早改善生活方式，以預防糖尿病。臨床上當患者被確診為二型糖尿病時，往往這一疾病早已在患者體內發展了多年，而且已經對血管和眼部造成了傷害，及早篩查出糖尿病的早期風險是很有價值的，這樣人們就可以盡早采取預防性療法。

???本發明人在長期研究中發現，導致重大疾病死亡率不降的重要原因是不能做到真正的早期診治。因此，開發出用于糖尿病發病前期的相關基因水平篩查試劑盒有非常大的臨床價值。

?隨著分子生物技術日益完善，功能基因組學，疾病基因組學等研究的深入展開，為了尋求更早期的診斷糖尿病、治療糖尿病、以及預防糖尿病，已取得長足進步。至今，我們已有可能在基因的一級轉錄功能產物mRNA水平上做更精確的早期篩查和診斷，在糖尿病前期做預測和篩查，這樣就能將糖尿病的發病率降下來，可以大大降低社會成本，進一步提高國民的健康體質。

發明人在研究中發現用雙標記技術，同步檢測蛋白質與檢測mRNA，有時候mRNA有表達，但蛋白質有時候沒有轉錄出來，它們有時候存在表達時空不對應現象，檢測mRNA會更準確。

本發明人在研究中發現PTPRD基因在糖尿病患者、高危人群、正常對照人有明顯的表達量變化，將PTPRD作為篩查糖尿病病變前期有非常重要的臨床意義。PTPRD在糖尿病患者病變中高表達。他作于糖尿病預警有非常重要的臨床意義。

發明人在長期的研究中，得出了一種新理念，重大疾病的臨床診治模式一定要改變，不能只停留現在治已?。òl病后診治），要做到預防性診治，做到治已病，只有這樣才能降低重大疾病的發病率和死亡率，降低社會成本和醫療成本。因此，發明人在開發和生產重大疾病的mRNA水平篩查試劑盒及治療藥物中，在理論和技術上都做了創新。特別是篩選臨床標本（正常人群、高危人群、疾病患者），突破了正常組織與病理組織比較的一貫性研發思路，來尋找和開發病變前期的mRNA水平，與疾病早期基因病理生理學演變密切相關，而且臨床意義非常重要mRNA靶標，將臨床上疾病形成后診治模式變成重大疾病的預防性診治，爭取了疾病診治的時間和空間，達到預防疾病。

根據現有的文獻資料采用原位雜交技術和組化免疫方法檢測PTPRD基因mRNA水平表達量的檢測技術及試劑盒未見報道。

本發明人在針對創新性發明的要求，設計了（糖尿病患者、高危人群、正常對照）不同數據例組，用原位雜交技術進行檢測，結果表明以上糖尿病病人高表達，高危人群有不同程度表達10-20%,正常對照都是不表達。表明PTPRD基因是糖尿病病變前期篩查的重要標志物。

原位雜交技術（in?situ?hybridization）是將分子生物學與細胞化學技術結合起來，以標記的核酸分子為探針，在組織細胞原位檢測特異性核酸分子的技術。其原理是使含有特異序列、經過標記的核酸單鏈（即探針），在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發生雜交，再以放射自顯影或免疫細胞化學方法對標記探針進行探測，從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。