[發明專利]KLOTHO蛋白的用途

無效

• 申請號: 201210533075.7
• 申請日: 2012-12-12
• 公開（公告）號: CN102961739A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 黃曙;湯小偉;季國忠;范志寧;王敏
• 申請（專利權）人: 黃曙;南京醫科大學第二附屬醫院
• 主分類號: A61K38/22
• 分類號: A61K38/22;A61K38/47;G01N33/68;A61P35/00
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司 32243
• 代理人: 盧霞

技術領域

????本發明提供了KLOTHO蛋白的用途，屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

原發性肝細胞性肝癌（簡稱肝癌，HCC）是世界范圍內最常見的惡性腫瘤之一，2007年12月美國癌癥學會（ACS）發布的數據顯示：肝癌年增66.7萬例，死亡59.8萬例，其中約50%的新患病例和死亡病例在中國，即肝癌對我國人民的健康威脅更大，已成為我國第二位腫瘤殺手，不僅使患者痛苦不堪，生存率低，而且給家庭、社會帶來嚴重的經濟和心理負擔。

Klotho是1997年發現與衰老相關的基因，位于人類染色體13q12，長度約為50kb，由5個外顯子和4個內含子組成。Koltho基因的cDNA含有二段不同的片段，分別編碼二種不同的蛋白：一為膜型，位于細胞膜上，其胞外區的蛋白序列與β-葡萄糖苷酶相似；二為分泌型，存在于血液循環中，被認為是一種肽類激素。Klotho基因在小鼠中的表達缺失導致其出現類似于人類衰老的各種表型，如動脈硬化、骨質疏松、肺氣腫、壽命縮短、皮膚萎縮、不育癥、運動失調等。近年來，越來越多的研究發現klotho基因可以調節IGF、TGF-β1、FGF等信號通路，參與氧化應激過程，并且與機體的免疫缺陷有關，提示klotho在惡性腫瘤的發生發展過程中發揮重要作用，并可進一步利用klotho作為腫瘤發生、分級的標志物以及作為靶點用于抗腫瘤的治療。

對現有技術的國內外文獻和專利進行檢索，至今未見任何KLOTHO蛋白及其相關組成成分用于肝細胞肝癌診斷和治療的研究報道。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足之處，提供一種KLOTHO蛋白在制備肝癌治療藥物中的用途，所述的KLOTHO蛋白的氨基酸序列如SEQ?NO.1所示。

本發明的另一個目的是提供一種KLOTHO蛋白在制備肝癌診斷制劑中的用途，所述的KLOTHO蛋白的氨基酸序列如SEQ?NO.1所示。

本發明具有如下技術效果：

（1）肝癌患者癌組織中KLOTHO蛋白表達低于癌旁組織，通過檢測個體肝組織和（或）血液中KLOTHO蛋白及其相關組成成分的表達降低預測肝癌的發生；

（2）KLOTHO蛋白對肝癌生長具有抑制作用，通過提高肝癌組織中KLOTHO蛋白及其相關組成成分的表達水平治療肝癌；?

（3）由于klotho參與了惡性增殖、凋亡、侵襲等細胞活動相關的病理過程，因此本發明對今后深入探討klotho與其他疾病的關系提供了經驗和應用基礎。?

附圖說明

??圖1為肝癌及癌旁組織KLOTHO蛋白免疫組化染色（×?400）結果：(A)?KLOTHO蛋白在腎小管上皮細胞中強陽性表達，作為KLOTHO蛋白免疫組化染色的陽性對照；(B)?KLOTHO蛋白在肝癌癌旁組織中高表達；(C)?KLOTHO蛋白在肝癌組織中低表達。

????圖2為Kaplan-Meier生存曲線。

??圖3為Klotho高表達載體pCMV6-Entry-KL上調KLOTHO蛋白的表達效果；?

??圖4為轉染Klotho高表達載體pCMV6-Entry-KL抑制肝癌HepG2細胞的增殖結果；?

??圖5為轉染Klotho高表達載體pCMV6-Entry-KL促進肝癌HepG2細胞的凋亡結果；

??圖6為轉染klotho基因特異性siRNA抑制KLOTHO蛋白的表達效果；

??圖7為轉染klotho基因特異性siRNA促進肝癌HepG2細胞的增殖結果；?

??圖8為轉染klotho基因特異性siRNA抑制肝癌HepG2細胞的凋亡結果；?

??圖9為加入外源性分泌型KLOTHO蛋白抑制肝癌HepG2細胞的增殖結果；

????圖10為腹腔注射外源性分泌型KLOTHO蛋白對荷瘤裸鼠肝癌組織生長的影響結果；

??圖11為腹腔注射外源性分泌型KLOTHO蛋白對荷瘤裸鼠肝癌組織中KLOTHO蛋白表達的影響結果。?

具體實施方式

以下結合具體實施例來進一步說明本發明。需注意的是，以下實施例只用于說明本發明，而不用于限制本發明的范圍。

下列實施例中提到的KLOTHO蛋白均為氨基酸序列如SEQ?NO.1所示的KLOTHO蛋白。

實施例1??肝癌患者癌組織中KLOTHO蛋白表達低于癌旁組織的臨床意義