[發明專利]泛素結合結構域融合蛋白在泛素化蛋白質的檢測和分離中的應用

無效

• 申請號: 201210533058.3
• 申請日: 2012-12-12
• 公開（公告）號: CN103059141A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 林瓊
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N9/10;C12N9/38;G01N33/68
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

1.一種用于泛素化蛋白質的檢測和分離的泛素結合域融合蛋白，其特征在于，該泛素結合域融合蛋白由親和標簽、泛素結合結構域構成；或者是由親和標簽、泛素結合結構域和它們之間的鏈接構成。

2.根據權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，親和標簽是：谷胱甘肽-S-轉移酶標簽，麥芽糖結合蛋白標簽，His?標簽，?T7標簽，泛素標簽，Flag?標簽，Myc?標簽，HA標簽，聚精氨酸標簽，polycysteine標簽??，polyphenylalanine標簽，BTag標簽，半乳糖結合域標簽，纖維素結合域標簽，thioredoxin標簽，金黃色葡萄球菌蛋白標簽，鏈球菌G蛋白標簽，鈣調蛋白標簽，β-半乳糖苷酶標簽，氯霉素乙酰轉移酶標簽，S-肽標簽，生物素標簽，advidin標簽,?streptavidin標簽或鏈球菌標簽。

3.根據權利要求2所述的融合蛋白，其特征在于所述泛素結合結構域是泛素結合結構，泛素相互作用序列，雙面泛素相互作用序列，泛素互動結構域，CUF，GAT，UBZ，UBC，UEV，UBM，NZF，UBPZnF，A20ZnF，GLUE，Jab1/MPN或PFU。

4.檢測泛素化蛋白的方法，包括以下步驟：

（1）將權利要求1所述泛素結合域融合蛋白固定到親和標簽配體;

（2）?將固定的泛素結合域融合蛋白與泛素化蛋白樣品共育;?

（3）?鑒別泛素化蛋白質。

5.根據權利要求4所述檢測泛素化蛋白的方法，其特征在于，親和標簽是：谷胱甘肽-S-轉移酶標簽，麥芽糖結合蛋白標簽，?His?標簽，?T7標簽，泛素標簽，Flag?標簽，Myc?標簽，HA標簽，聚精氨酸標簽，polycysteine標簽??，polyphenylalanine標簽，BTag標簽，半乳糖結合域標簽，纖維素結合域標簽，thioredoxin標簽，金黃色葡萄球菌蛋白標簽，鏈球菌G蛋白標簽，鈣調蛋白標簽，β-半乳糖苷酶標簽，氯霉素乙酰轉移酶標簽，S-肽標簽，生物素標簽，advidin標簽,?streptavidin標簽或鏈球菌標簽。

6.根據權利要求4所述檢測泛素化蛋白的方法，其特征在于所述泛素結合結構域是泛素結合結構，泛素相互作用序列，雙面泛素相互作用序列，泛素互動結構域，CUF，GAT，UBZ，UBC，UEV，UBM，NZF，UBPZnF，A20ZnF，GLUE，Jab1/MPN或PFU。

7.根據權利要求4所述檢測泛素化蛋白的方法，其特征在于步驟（2）中所述泛素化蛋白的樣品是細胞裂解液。

8.根據權利要求4所述檢測泛素化蛋白的方法，其特征在于步驟（3）中泛素化蛋白的測定是用抗體免疫印跡法。