[發(fā)明專利]靶向性抗腫瘤藥物和基因共載載體材料及制備和應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210531834.6
• 申請(qǐng)日: 2012-12-12
• 公開（公告）號(hào): CN102949727A
• 公開（公告）日: 2013-03-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊曉英;曹秀芬;王銀松;段宏泉;陳永勝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K47/02
• 分類號(hào): A61K47/02;A61K47/36;A61K47/42;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 王小靜

1.一種基于功能化氧化石墨烯的靶向性抗腫瘤藥物和基因共載載體材料，其特征在于它是將靶向分子與可溶性殼聚糖的部分氨基通過酰胺鍵連接，制備二者偶聯(lián)物，然后再將其與氧化石墨烯連接，最后利用一個(gè)帶季銨基團(tuán)的環(huán)氧化合物對(duì)其進(jìn)一步季銨化而制成，利用殼聚糖的季銨化部分通過靜電引力負(fù)載基因分子；再采用非共價(jià)鍵方法，通過π－π共軛、氫鍵、疏水效應(yīng)作用負(fù)載抗腫瘤藥物，其中，靶向分子、殼聚糖、氧化石墨烯與帶季銨基團(tuán)的環(huán)氧化合物的質(zhì)量比：1：1-50：0.2-20：0.1-100；制備方法是：在脫水劑存在下，將靶向分子與可溶性殼聚糖在水溶液中攪拌反應(yīng)，旋蒸，濃縮物過葡聚糖凝膠柱，產(chǎn)物靶向分子和殼聚糖偶聯(lián)物濃縮凍干后在脫水劑的存在下與氧化石墨烯超聲攪拌反應(yīng)，分離，洗滌產(chǎn)物，再與帶季銨基團(tuán)的環(huán)氧化合物在80℃下超聲攪拌反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后固體產(chǎn)品經(jīng)反復(fù)離心洗滌，得到帶正電荷的功能化氧化石墨烯，分散在水或培養(yǎng)基RPMI?1640中與抗腫瘤藥物和基因分子混合，孵育即可；所述的抗腫瘤藥物的負(fù)載量為0.05~2.0?mg/mg；所述的基因分子的負(fù)載量為0.01～50?μmol/g；所述的靶向分子是指具有腫瘤靶向或肝靶向的各種分子：葉酸、乳糖酸、半乳糖苷、甘草次酸或腫瘤細(xì)胞靶向的各種抗體和小肽。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的載體材料，其特征在于所述的含有季銨基團(tuán)的環(huán)氧化合物指2,3-環(huán)氧丙基三甲基氯化銨（2,3-Epoxypropylttrimethylam?monium?Chloride）等帶有環(huán)氧基或季銨基的所有化合物。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的載體材料，其特征在于所述的藥物是指具有水溶性的各種藥物：（鹽酸）阿霉素及其衍生物類藥物、（鹽酸）道諾霉素、（鹽酸）米托蒽醌、甲氨喋呤、（硫酸）長春堿及其衍生物類藥物、（鹽酸）羥基喜樹堿、（鹽酸）阿糖胞苷、5－氟尿嘧啶等中的一種或兩種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的載體材料，其特征在于所述的基因分子是指：抑制腫瘤生長的端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶siRNA、抑制腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性的多藥耐藥siRNA、抑制腫瘤細(xì)胞生長或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的siRNA和具有免疫調(diào)節(jié)作用的各種siRNA等中的一種或兩種，或抑癌基因Pdcd4（programmed?cell?death?4）、RECK、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子Rb、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子p53、負(fù)調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子WT；或周期蛋白依賴性激酶抑制因子（CKI）：p15、p16、p21、信號(hào)通路的抑制因子ras?GTP酶活化蛋白（NF-1）、磷脂酶（PTEN）、DNA修復(fù)因子BRCA1、DNA修復(fù)因子BRCA2；或與發(fā)育和干細(xì)胞增殖相關(guān)的信號(hào)途徑組分：APC、Axin。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的載體材料，其特征在于所述的氧化石墨烯是指分子骨架由六邊形晶格排列的單層石墨原子組成，且經(jīng)過功能化而得到的含有含氧基團(tuán)的二維平面材料，其厚度分布在0.3nm到2nm之間，大小分布在10nm²到400μm²之間；該功能化氧化石墨烯材料可采用機(jī)械剝離法、晶體外延生長法及化學(xué)氧化等方法制備；該氧化石墨烯材料能很好的分散到水溶液中。

6.一種權(quán)利要求1所述的基于氧化石墨烯的靶向性抗腫瘤藥物和基因共載載體材料的制備方法，其特征在于包括如下的步驟：

1）靶向分子和可溶性殼聚糖偶聯(lián)物的制備：在脫水劑的存在下，將靶向分子和可溶性殼聚糖混溶于水溶液中，室溫?cái)嚢枰惶欤w系旋蒸脫溶，濃縮物過葡聚糖凝膠柱以除去小分子雜質(zhì)，將產(chǎn)物濃縮凍干，獲得二者偶聯(lián)產(chǎn)物；

2）將步驟1）制備的偶聯(lián)產(chǎn)物修飾在氧化石墨烯上，在脫水劑的存在下，將靶向分子和可溶性殼聚糖偶聯(lián)物與氧化石墨烯混合超聲溶于水中，水浴超聲60W，1小時(shí)，室溫?cái)嚢杷奶欤a(chǎn)物通過反復(fù)離心、超聲分散，水浴超聲60W，2分鐘，循環(huán)，進(jìn)行洗滌，除去未反應(yīng)的偶聯(lián)物；

3）將步驟2）制備的功能化氧化石墨烯與2,3-環(huán)氧丙基三甲基氯化銨混溶于水溶液中，加氫氧化鈉調(diào)pH值至7-8，80℃攪拌反應(yīng)24小時(shí)，產(chǎn)物通過反復(fù)離心、超聲分散，水浴超聲60W，2分鐘，循環(huán)，進(jìn)行洗滌，除去未反應(yīng)的2,3-環(huán)氧丙基三甲基氯化銨；

所述的靶向分子和可溶性殼聚糖偶聯(lián)物和脫水劑的質(zhì)量比為1：1-1000：0.1-10。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述的氧化石墨烯和步驟1）制備的偶聯(lián)產(chǎn)物和脫水劑的質(zhì)量比為1：5-50：0.5-5。