[發明專利]樺褐孔菌液體發酵產物氯仿提取物在制備治療糖尿病藥物中的應用

有效

• 申請號: 201210530341.0
• 申請日: 2012-12-11
• 公開（公告）號: CN103006655B
• 公開（公告）日: 2019-07-16
• 發明（設計）人: 許正宏;史勁松;陸震鳴;耿燕;李恒;許泓瑜;徐國華;王英燕;錢建瑛
• 申請（專利權）人: 江南大學;江蘇神華藥業有限公司
• 主分類號: A61K31/473
• 分類號: A61K31/473;A61K31/517;A61K31/496;A61K31/495;A61K31/27;A61K31/4545;A61K31/44;A61K31/165;A61K31/397;A61K31/575;A61K31/56;A61K31/351;A61K3
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本發明涉及樺褐孔菌發酵菌粉氯仿提取物及其中化合物在治療糖尿病藥物中的應用，該提取物包含19種化合物，19中化合物中的1種或幾種組合，可用于制備二肽基肽酶IV抑制劑和治療糖尿病藥物。

技術領域

本發明涉及一種藥食用真菌提取物，特別具體涉及樺褐孔菌液體發酵產物氯仿提取物在制備治療糖尿病藥物中的應用。

背景技術

樺褐孔菌（Inonqqus obliquus）屬于真菌門、擔子菌亞門、層菌綱、非褐菌目、多孔菌科、褐臥孔菌屬，是一種寄生在多種樹木（白樺、銀樺、榆樹、赤楊等）樹皮上的白腐菌，主要分布于俄羅斯西伯利亞和遠東地區、北歐、波蘭、我國大小興安嶺以及長白山地區、日本北海道及北美北部等北緯45°～50°的寒冷地區。樺褐孔菌是一種珍稀的藥食用真菌，具有多種藥用價值，早在16世紀，北歐多個國家的民間就開始食用樺褐孔菌子實體，用來防治胃癌、腸癌、心臟病、糖尿病等多種疾病。由于樺褐孔菌野生資源匱乏，深層發酵技術逐漸被應用于樺褐孔菌的生產。近幾年的研究表明，樺褐孔菌提取物表現出多種生物活性，主要有抗癌、抗氧化、降血糖、抗病毒、抗真菌、保肝作用等。越來越多的活性物質被發現，其中主要包括多糖、樺褐孔菌素、樺褐孔菌醇、多種氧化三萜類化合物、羊毛甾醇型三萜類化合物、木質素以及黑色素類等。

二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidaseIV,DPP-IV)是一種跨膜的絲氨酸蛋白酶，屬于脯氨酰寡肽酶（prolyloligopeptidase, POP）家族，其廣泛分布于腎臟、胃腸道、結締組織、淋巴結等組織中，具有多種活性。DPP-IV是由兩個亞基組成的一種Ⅱ型跨膜糖基化蛋白，分子質量為240kD，由766個氨基酸組成。DPP-IV的活性中心細胞膜外部分C末端區域，凡是N末端第二位上存在脯氨酸(Pro)殘基或丙氨酸(Ala)殘基的多肽多是其底物，胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）就是其中之一。GLP-1是由小腸中L細胞分泌的一種內源性激素，主要是通過促進胰島素分泌、抑制胰高血糖素的釋放、延緩胃排空以及胰島β細胞保護作用來實現控制血糖的目的。GLP-1是由36個氨基酸組成的多肽，其N段第二位為Ala，能夠被DPP-IV識別，故其在分泌后很快便被DPP-IV剪切而失去降血糖的活性。因此，抑制DPP-IV的活性，可以減少GLP-1的降解，延長其半衰期，增加其在血液中的濃度，進而起到降血糖的作用。默克公司的sitagliptin于2006年8月獲FDA批準在墨西哥上市，是第一個獲準上市的DPP-IV抑制劑類藥物，該藥也是目前唯一在我國上市的此類藥物。諾華公司的vildagliptin與百時美施貴寶公司的saxagliptin分別在歐盟及歐美上市，日本武田公司的alogliptin已在日本獲準，目前正在申請在美國上市，目前還有很多正處于待批和臨床階段。利用此類藥物降糖無低血糖風險、避免了體重增加等副作用，與其他藥物（如二甲雙胍）聯用效果更佳穩定。

發明內容

本發明的目的在于提供樺褐孔菌液體發酵產物的氯仿提取物在制備DPP-IV抑制劑和制備治療糖尿病藥物中的應用。

本發明研究了樺褐孔菌的發酵特性，并采用深層發酵技術制備了樺褐孔菌的發酵產物，50 L發酵罐對樺褐孔菌進行規?；l酵，第9 d生物量達到最大（8.6 g/L）；得到樺褐孔菌菌粉201.96 g，得率6.73 g/L。采用不同溶劑對樺褐孔菌發酵產物進行提取，得到10種提取物，對各提取物抑制活性進行評價，其中菌粉氯仿提取物活性較高，200 mg/L濃度下對DPP-4的抑制率分別為38.1%和31.2%。

本發明采用硅膠柱層析、Sephadex LH-20柱層析、大孔樹脂柱層析、制備型HPLC等多種現代分離純化技術對菌粉氯仿提取物及發酵液甲醇提取物進行分離純化，200 mg/L濃度下活性組分抑制率分別升高至47.1%和51.7%，分離得到了活性部位。

本發明利用UPLC-Q-TOF-MS對活性部位的化合物結構進行推斷，推斷出19個化合物的化學結構，其中生物堿類物質10個，甾類、三萜類及其他物質9個。