[發明專利]新型鈉肽、制備方法及其在制備基因工程藥物中的應用

有效

• 申請號: 201210529925.6
• 申請日: 2012-12-11
• 公開（公告）號: CN103601808A
• 公開（公告）日: 2014-02-26
• 發明（設計）人: 李凌云;周兆平;王曉紅;章剛;林楓
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/70;A61K38/22;A61P9/00;A61P13/12
• 代理公司: 深圳市順天達專利商標代理有限公司 44217
• 代理人: 汪麗

1.一種基因工程新型鈉肽，其特征在于，所述新型鈉肽由腦鈉肽和蛇鈉肽連接組成；所述腦鈉肽位于所述新型鈉肽的N端，且所述蛇鈉肽位于所述新型鈉肽的C端；所述腦鈉肽包括由兩個半胱氨酸殘基形成的二硫鍵環狀結構。

2.根據權利要求1所述的基因工程新型鈉肽，其特征在于，所述新型鈉肽由41個氨基酸組成，其中位于N端的腦鈉肽具有26個氨基酸，位于C端的蛇鈉肽具有15個氨基酸。

3.根據權利要求1所述的基因工程新型鈉肽，其特征在于，所述腦鈉肽為人腦鈉肽且包括一個完整的人腦鈉肽的環狀功能區，所述蛇鈉肽具有完整的蛇鈉肽C端的15個氨基酸。

4.根據權利要求1-3中任一權利要求所述的基因工程新型鈉肽，其特征在于，所述新型鈉肽具有序列表中的SEQ?ID?No：7所示的氨基酸序列。

5.一種權利要求1-4中任一權利要求的基因工程新型鈉肽的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

A：分別獲取腦鈉肽基因和蛇鈉肽基因；

B：通過PCR方法將步驟A中的所述腦鈉肽基因和蛇鈉肽基因拼接合成新型鈉肽基因；所述新型鈉肽基因由位于其N端的所述腦鈉肽基因和位于其C端的所述蛇鈉肽基因連接組成；

C：采用原核表達載體構建包括所述新型鈉肽基因的表達質粒；以及

D：將步驟C中形成的表達質粒轉化至表達菌株中進行誘導培養，表達所述新型鈉肽。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，獲取的所述腦鈉肽基因為人腦鈉肽基因。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟A包括以下子步驟：

獲取全長人腦鈉肽基因；

從所述全長人腦鈉肽基因獲取所述人腦鈉肽基因的N末端基因片段：構建引物序列3：5’-GAA?TTC?GTT?CGT?GGT?CCG?CGT?AGC?CCG?AAG?ATGGTG?CAA-3’和引物序列4：5’-AGC?GTT?CGG?ACG?CGG?GTC?ACG?CAG?GCTCGG?GCA?GCC?CAG?GCC?ACT?GGA-3’：以及

獲取所述蛇鈉肽基因的C末端基因片段：構建引物序列5：5’-GT?GGA?TCCTCA?AGC?GCT?AGT?GCT?CGG?AGC?GTT?CGG?ACG?CGG?GTC?ACG-3’。

8.根據權利要求5-7中任一權利要求所述的制備方法，其特征在于，在所述步驟D之后，所述方法還包括步驟E：離心收集所述表達菌株的菌體，進行純化后得到所述新型鈉肽。

9.根據權利要求5-7中任一權利要求所述的制備方法，其特征在于，在所述步驟C中，所述原核表達載體為pGEX-4T-1或pCW；在所述步驟D中，所述表達菌株為DH5α、BL21、Rosetta或Rosetta-gami。

10.權利要求1-3中任一權利要求的基因工程新型鈉肽在制備用于保護、預防及治療心血管疾病和腎臟疾病的基因工程藥物中的應用。