[發明專利]膽堿酯酶檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201210529456.8
• 申請日: 2012-12-10
• 公開（公告）號: CN103865978A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 景晟
• 申請（專利權）人: 上海復星醫藥（集團））股份有限公司;上海復星長征醫學科學有限公司
• 主分類號: C12Q1/46
• 分類號: C12Q1/46
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司 31213
• 代理人: 王巍

技術領域

本發明涉及生物試劑，具體涉及一種檢測試劑盒,尤其涉及一種膽堿酯酶檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

膽堿酯酶（cholinesterase）是一類糖蛋白，以多種同功酶形式存在于體內。一般可分為真性膽堿酯酶和假性膽堿脂酶。真性膽堿酯酶也稱乙酰膽堿酯酶（acetylcholinesterase），主要存在于膽堿能神經末梢突觸間隙，特別是運動神經終板突觸后膜的皺摺中聚集較多；也存在于膽堿能神經元內和紅細胞中。此酶對于生理濃度的Ach膽堿酯酶作用最強，特異性也較高。一個酶分子可水解3×10分子Ach。假性膽堿酯酶（PCHE）存在于血清或血漿中，除可作用于乙酰膽堿外，還可作用于其他膽堿類化合物。當遇到肝臟合成功能下降，CHE（膽堿酯酶）和真性膽堿酯酶在血液中的濃度隨之降低，其降低程度與肝臟合成功能損害程度呈正相關。真性膽堿酯酶將膽堿脂水解為膽堿和有機酸，臨床上可以根據其水解產物的多少，來測算出CHE（膽堿酯酶）的活性。因此，膽堿酯酶在臨床用途如下：

（1）肝臟疾病：膽堿酯酶是反映肝細胞蛋白合成代謝功能的指標，在病情嚴重的肝炎患者中，其PCHE降低與肝病變程度成正比，與血清白蛋白平行；慢性肝炎、肝硬化、肝癌時如PCHE持續降低則提示預后不良；肝功能不全時PCHE明顯降低。

（2）遺傳性血清PCHE異常病、營養不良時血清PCHE均降低。

（3）腎臟疾病（排泄障礙）、肥胖、脂肪肝、甲亢和遺傳性高PCHE血癥者，血清PCHE水平均可升高。

（4）是協助有機磷中毒診斷及預后估計的重要手段。含有機磷的殺蟲劑能抑制紅細胞內真性膽堿酯酶和血清中的假性膽堿酯酶。有機磷中毒時血清PCHE降低檢測方法：

硫代膽堿+5，5二硫代－2－硝基苯甲酸─────→5－巰基－2－硝基苯甲酸

由于丁酰硫代膽堿極不穩定，非常容易水解，有專利報道（CN100557423C）底物在酸性溶液中會穩定，但是實際使用過程中效果仍然不理想，長時間放置后底物依然很容易水解。Cholinesterase?assayautomated?in?the?Cobas-Bio?centrifugal?analyzer.ClinicalChemistry?August?1987?vol.33no.8?1460-1462報道了穩定丁酰硫代膽堿的方法，包括充氮氣，加保護劑等。然而，這些方法都不能徹底解決丁酰硫代膽堿水解的問題，底物在長時間放置后，還是會逐步水解，嚴重影響試劑的空白和靈敏度，從而最終影響檢測結果。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于克服上述不足之處，研究設計穩定底物的物質，提高試劑穩定性，用于檢測膽堿酯酶的試劑。

本發明提供了一種膽堿酯酶檢測試劑盒，該試劑盒由下列試劑1和

試劑2，按4份：1份的比例組成：

試劑1：（1L）（試劑體積）

試劑2：（1L）（試劑體積）

本發明的檢測膽堿酯酶試劑盒，在使用時,先將試劑1加入檢測樣本后再加入試劑2,即可進行檢測。

本發明的另一目的是提供了所述膽堿酯酶試劑盒的制備方法：該方法包括下列步驟：

(一)制備試劑1:（1L）（試劑體積）

（1）先向容器內加入為總量80%的去離子水；

（2）依次加入磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、羥基亞乙基二膦酸、疊氮鈉、5，5二硫代－2－硝基苯甲酸；

（3）最后加入剩余量的去離子水至總體積為1L混合均勻，即得;

(二)制備試劑2:（1L）（試劑體積）

向容器內依次加入酒石酸、羥基亞乙基二膦酸、亞硫酸鈉、苯甲酸鈉、丁酰硫代膽堿、乙二胺四乙酸、異丙醇，去離子水加至總體積為1L混合均勻，即得。

本發明人通過研究試驗證實：由于本發明在試劑盒中加入了底物保護劑羥基亞乙基二膦酸和異丙醇,克服了現有技術使用乙二胺四乙酸作保護劑產生的缺陷，對試劑中的底物有很強的保護作用，尤其是隨著時間的推移，對底物的保護作用更明顯。本發明的試劑盒檢測效果好，使用方便，還可降低醫療費用，有較大的臨床應用價值。

具體實施方式

以下實施例所用試劑原料均通過市售得到。

實施例1制備膽堿酯酶檢測試劑盒

組成:試劑1：（1L）（試劑體積）

試劑2：（1L）（試劑體積）

制備: