[發明專利]乳糖代替IPTG誘導重組雞α干擾素在大腸桿菌中的表達

無效

• 申請號: 201210528728.2
• 申請日: 2012-12-11
• 公開（公告）號: CN102994596A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 馬仲彬;徐公豹;李炳志;李秋霞;申艷敏;王興濤;王新娟
• 申請（專利權）人: 河南省康星藥業股份有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12R1/19
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種乳糖代替IPTG誘導重組雞α干擾素在大腸桿菌中的表達，其特征在于包括如下步驟：

（1）種子培養方法：從-70℃冰箱中取出含雞α干擾素重組質粒的甘油保藏管1支，于冰水浴中解凍，混勻后以1%接種量轉接到50mlLB培養基中，在37℃的恒溫搖床中振蕩培養12h，轉速為200r/min;

（2）發酵和誘導：將經活化的種子液按1%的接種量接種于2L培養基中，37℃恒溫搖床中振蕩培養，轉速為200r/min,當菌體濃度達到一定OD值時，添加誘導劑乳糖,分別調整誘導劑濃度、誘導時機、誘導培養時間因素進行發酵培養，以誘導后目的蛋白的濃度作為依據，確定最佳誘導方案。

2.根據權利要求1所述的發酵方法，其特征在于：所述的宿主菌為大腸桿菌（Escherichia?coli）BL21(DE3)，表達載體為PET28a。

3.根據權利要求1所述的發酵方法，其特征在于：菌體濃度分別為OD₆₀₀為0.4-1.6時添加誘導劑。

4.根據權利要求1所述的發酵方法，其特征在于：用Bradford法測定蛋白質濃度，以牛血清白蛋白作為標準蛋白。