[發明專利]一種發酵生產葡萄糖氧化酶的方法

有效

• 申請號: 201210528312.0
• 申請日: 2012-12-10
• 公開（公告）號: CN102936585A
• 公開（公告）日: 2013-02-20
• 發明（設計）人: 張娟;陳堅;顧磊;堵國成;沈伊娜;李婷;李夢潔;殷政
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;C12R1/84
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

1.一種發酵生產葡萄糖氧化酶的方法，以一種產葡萄糖氧化酶的基因工程菌為生產菌株，保藏編號為CCTCC?NO：M?2012266，于2012年7月3日保藏于中國典型培養物保藏中心；其特征在于將活化后YPD擴培的菌液接入全自動發酵罐中的發酵培養基進行發酵處理，接種量為10%，以25%氨水控制pH?5.5，溫度30℃，調節攪拌轉速和通氣量維持溶氧30%以上；當甘油耗盡DO迅速上升時，開始流加50%甘油補料生長培養基，當菌體干重達到100g/L后，停止補料；待甘油再次耗盡，繼續保持基質匱乏狀態約1h后，開始流加誘導培養基，誘導條件為：溫度降低至20-25℃，控制甲醇和山梨醇的混合添加比例為10:1-5:1（W/W），并且維持整個誘導過程的甲醇濃度為1.5-2.5%(W/V)，誘導葡萄糖氧化酶表達。

2.一種發酵生產葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于誘導條件優選：溫度降低至22°C，控制甲醇和山梨醇的混合添加比例為10:1（W/W），并且維持整個誘導過程的甲醇濃度為1.8%(W/V)，誘導葡萄糖氧化酶表達。

3.權利要求1所述的方法，其特征在于所述發酵培養基組成為（1L）：85%磷酸26.7mL/L,CaSO₄?0.93g/L,K₂SO₄?18.2g/L,MgSO₄·7H₂O?14.9g/L,KOH?4.13g/L,甘油40.0g/L,PTM₁?4.35mL/L,25%氨水調pH?5.5；其中PTM₁（1L）組成為：CuSO₄,6.0g;KI,0.08g;MnSO₄,3.0g;Na₂MoO₄,0.2g;H₃BO₃,0.02g;CoCl₂,0.5g;ZnCl₂,20.0g;FeSO₄·7H₂O,65.0g;biotin,0.2g;and?98%(w/w)H₂SO₄,5mL。

4.權利要求3所述的方法，其特征在于所述補料生長培養基：50%(W/V)甘油，其中含12mL/LPTM₁。

5.權利要求1-3任一所述的方法，其特征在于所述發酵誘導培養基組成為：100%甲醇，其中含12mL/LPTM₁與山梨醇其中含12mL/LPTM₁混合之比為10：1（W/W）。

6.權利要求1-4任一所述的方法，其特征在于所述產葡萄糖氧化酶的基因工程菌保藏編號為CCTCC?NO：M?2012266，于2012年7月3日保藏于中國典型培養物保藏中心。