[發明專利]一種根系發達的紅景天無菌苗的培養方法

有效

• 申請號: 201210526953.2
• 申請日: 2012-12-10
• 公開（公告）號: CN103858756A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 周曉馥;徐洪偉;未曉巍
• 申請（專利權）人: 吉林師范大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 吉林省長春市新時代專利商標代理有限公司 22204
• 代理人: 石岱

技術領域

本發明涉及了一種根系發達的紅景天無菌苗的培養方法，屬于現代生物方法領域。

背景技術

高山紅景天（Rhodiola?s活性炭halinensis?A．Bor．）別名庫頁紅景天，系景天科紅景天屬(Rhodiola?L．)，是一種生長在高海拔低溫山區的多年生雙子葉草本植物。在我國多分布于東北，是長白山地區的稀有珍貴藥用植物之一。高山紅景天的根、莖、葉、花、種子均可入藥，有效成分為紅景天甙、黃酮類化合物及多種微量元素，紅景天不但具有抗氧化、抗疲勞、抗缺氧、抗寒冷、抗衰老、抗微波輻射等類似“適應原”功效。由于醫藥食品工業的大量需求，野生高山紅景天被人為無計劃采挖，導致資源日趨枯竭，當地政府已經禁止采挖。自20世紀80年代初我國已開始紅景天人工引種栽培的研究，?由于高山紅景天長期生長在極其惡劣而多變的自然環境中，不耐高溫、潮濕氣候以及易發病等原因，對高山紅景天的大規模培養增加了難度。

活性炭在培養基中能吸附有害物質，活性炭在培養基中能吸附培養物在培養過程中分泌的酚類、醌類等物質，防止導致褐變的有害物質積累，褐化現象的產生一般認為是外植體向外溢出的酚類與蒽類等化合物氧化所致，沒有加入活性炭的培養基中的無菌苗，在組培過程中出現褐化現象，而加入活性炭的培養基中的無菌苗，在組培過程中很少出現褐化現象，這說明活性炭在克服外植體褐化問題上有良好的效果。

在無菌苗的生長培養基中，既有植物代謝產生的有害產物，也有促進植物生長添加的生長調節物質。相關研究發現，在植物培養基中添加活性炭，活性炭可以通過自身的吸附能力而發揮作用，對試管苗的生長發育起到促進作用，不同種屬植物間的活性炭使用量尚有差異。為此，通過在培養基中加入不同濃度的活性炭，尋求適宜的高山紅景天無菌苗生長、增殖的活性炭用量，為高山紅景天的規模化快速繁殖提供參考十分必要。

發明內容

本發明的目的在于克服現有高山紅景天組織培養過程中苗長勢弱、生根難、根數較少、苗齡短等問題，提供一種根系發達的紅景天無菌苗的培養方法，以獲得優質的高山紅景天再生植株。

本發明的目的是這樣實現的，該方法包括以下步驟：

（1）、高山紅景天野生苗的采集：在每年的7月份，在長白山海拔高度為1700-2500?m處采集高山紅景天的野生幼苗，幼苗選取時要選擇幼莖，選取距離根部2cm以上部位，在幼莖的選取時要注意保持嫩莖的新鮮；

（2）、對采集得到的高山紅景天野生苗的莖進行消毒處理：利用自來水流水沖洗10min，在超凈工作臺中用75%的酒精浸泡30s，用無菌水沖洗2次，再用10%的NaClO溶液浸泡10?min，用無菌水沖洗4次，備用；

（3）、高山紅景天幼莖的切段處理：將已經經過消毒處理的高山紅景天幼莖用培養皿盛好，放在超凈工作臺上，切取成長度為1.0cm左右莖段，備用。

（4）、培養基的配制：基本培養基選用的是1/2MSB5培養基2.37?g/L?+蔗糖15g/L+瓊脂6g/L，選取1個1L容量的器皿，稱量2.37g的基本培養基之后，加完培養基之后，用蒸餾水定容至1L，所述培養基的pH值為5.83，將配好的培養基在121℃進行高壓蒸汽滅菌20min，滅菌之后，1L的培養基分裝成20個小器皿，備用。

（5）、根系發達的高山紅景天無菌苗的培養：在超凈工作臺中，將切好備用的高山紅景天莖段轉接到活性炭濃度為0.4?g/L的培養基中，每個小器皿中接種4個，放在人工智能氣候箱中培養。在培養過程中，每天對高山紅景天的生長情況進行觀察，在培養了60天之后，將根系發達的高山紅景天無菌苗從培養瓶中取出即得。

（6）、培養條件的選擇：高山紅景天的培養均在人工智能氣候箱內進行，溫度為24±2℃；光照強度為6000-8000lx，光周期為16h光照/8h黑暗。

本發明方法具有以下優點和積極效果：

1、本發明通過在培養基中加入不同濃度的活性炭，確定適宜的高山紅景天無菌苗生長、增殖的活性炭用量，旨在為高山紅景天的規模化快速繁殖提供參考。

2、本發明中通過在高山紅景天的培養中添加活性炭作為吸附劑，降低了實驗成本。

3、本發明中在高山紅景天的組織培養中加入活性炭，實現了一步成苗的簡化培養程序。

4、本發明通過在高山紅景天組織培養時加入活性炭，有利于紅景天的根系生長，并且利于有效次生代謝產物的積累。

附圖說明

圖1是本發明7月份在長白山海拔1700-2500?m高度采集到的高山紅景天幼苗示意圖。