[發明專利]一種具有標記位點且能顯著提高鯉魚體重的雜交方法

無效

• 申請號: 201210525446.7
• 申請日: 2012-12-10
• 公開（公告）號: CN103141413A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 張成鋒;蘇勝彥;董在杰;朱文彬;袁新華;徐跑
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院淡水漁業研究中心
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00;C12Q1/68
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀昌

技術領域

本發明涉及一種具有標記位點且能顯著提高鯉魚體重的雜交方法。

背景技術

2008年，中國淡水魚養殖產量達到1836.9萬噸，其中，鯉235.1萬噸，占12.8％。鯉魚2010年產量253.85萬噸，可以看出，鯉魚產業在我國，乃至世界上占有舉足輕重的地位。因此，鯉魚生產性能的提高對產業的發展有重要的意義。建鯉和黃河鯉雜交具有雜種優勢，并發現它們的正交后代具有較高的特殊配合力。

分子育種，分子設計育種已應用于良種選育，包括基于分子標記的配對繁殖技術、遺傳參數評估等。而通過分子標記來研究雜種優勢，并加以利用成為可行的手段。2012年已成功獲得鯉IGF2a基因序列，并發現IGF2a3#引物檢測到的多態性與種質特異性有關（Shengyan?Su,?Zaijie?Dong,?Zhengyuan?Liang,?Junchao?Ming,?Jiangqi?Qu?Pao?Xu,?Xinhua?Yuan.?Molecular?cloning?and?single?nucleotide?polymorphism?analysis?of?IGF2a?genes?in?the?common?carp?(Cyprinus?carpio).Genetic?molecular?research,2012,?11（2）：1327-1340.）。因此，通過研究IGF2aDNA序列的多態性來分析建鯉和黃河鯉的雜種優勢，由此研究出能顯著提高鯉魚體重的雜交方法。

發明內容

本發明提供一種具有標記位點且能顯著提高鯉魚體重的雜交方法。

具體方案如下：選用黃河鯉父本與建鯉母本進行雜交，見專利申請文件（201110285312.8）；待后代長至體重為75g左右時，進行PIT標記，同時測量每條魚的體重，并剪尾鰭，放置于已裝酒精的離心管中，每個組合30條魚。然后根據TaKaRa的DNA提取試劑盒3.0提取采集樣本的DNA。通過克隆鯉魚IGF2a^9#引物進行PCR擴增，PCR產物直接送測序公司進行測序，根據測序結果，分析每條魚的IGF2a^9#引物所擴增區域的單核苷酸多態性，根據得到的多態位點分析其與不同組合體重之間的關聯。

有益效果

根據分析多態位點與體重和組合的關聯，發現鯉IGF2R^9#126號位點存在G到A的突變，并且這種突變是雜合子，且只在Hj和Jj組合中發現（n=30/每個組合），并且這種突變只在?Hj組合顯示出體重的提高，由此可知選用黃河鯉父本與建鯉母本進行雜交得到的鯉魚新苗體重顯著增加。

附圖說明

圖1?IGF2a^9#引物檢測到的建鯉和黃河鯉純繁和雜交組合的126號位點的多態性?A?此位點多態性與體重的關聯分析

B1?此位點的野生型測序圖

B2此位點的雜合型測序圖；

字母不同表示差異顯著，體重單位為g。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作進一步說明。

本發明中的親本來源為中國水產科學研究院淡水漁業研究中心的黃河鯉（Cyprinus?carpio?haematopterus?Temminck?et?Schlegel）父本與建鯉（C.carpio?var.jan）母本。

實施例1???鯉魚雜交優勢種群的篩選

（1）生產建鯉（J或j）、黃河鯉（H或h）自交和正反交后代（其中大寫字母表示父本，小寫字母表示母本），共計4個組合：Jj，Jh，Hh，Hj。通過人工繁殖方式控制繁殖時間在一天之內，通過網箱保證每個家系的隔離。養殖一周后，控制每個網箱的數量為100條左右，養殖一個月后，換40目的網箱養殖；

（2）當鯉魚養殖到體重達75?g左右時，每個組合隨機選取50條魚，使用丁香油

麻醉，然后進行PIT標記（具體方法同專利文件ZL200710191251），測量體重，并記錄。同時剪尾鰭放置于已裝入酒精的2mL離心管中進行離心去雜，記錄好離心管的標號，并與PIT標記一一對應；

（3）將在酒精中保存的魚尾鰭，采用TaRaKa?DNA提取試劑盒3.0抽提DNA，并通過檢測OD260/0D280的方法測定提取濃度和內參基因GAPDH擴增PCR的方法檢測質量。待質量合格后，用表1中引物擴增PCR，并送到Introgen公司測序。