[發明專利]一種雙膜結構移植材料的制備方法及用途

有效

• 申請號: 201210525097.9
• 申請日: 2012-12-07
• 公開（公告）號: CN103100112A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 張旻;陳永進;趙寅華;李軼杰;劉南霞;程百祥;杜靜;陳慧;李強
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;A61L27/22;A61L27/54
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技術領域

本發明屬于組織工程和生物材料領域，涉及一種雙膜結構移植材料，特別涉及一種干細胞膜片片段復合富血小板纖維蛋白膜雙膜結構移植材料的制備方法及用途。

背景技術

目前，利用干細胞技術進行組織缺損修復通常采用干細胞懸液和外源性支架材料復合的方法，主要形式有三種：單純細胞懸液局部移植；細胞懸液接種于外源性支架材料；細胞懸液接種于支架材料后體外行三維培養。然而，上述移植方法存在諸多不足：首先，細胞在用胰酶消化獲得懸液的過程中，細胞間信號分子和細胞外基質的結構遭到破壞，細胞本身的活性也受到了影響；其次，細胞移植的量難以控制，細胞量太少，細胞難以迅速定植于移植局部，細胞量太多，又會造成局部細胞堆積，不利于細胞伸展和營養供應；最后，支架材料的移植和降解可能造成宿主毒性反應和免疫反應，而未降解的支架材料會造成纖維包裹，影響血供和組織結構重建。因此，需要尋找一種制備干細胞復合支架材料的新方法，減少干細胞的流失，提高其生物學活性，減少支架材料的吸收和宿主的免疫反應，提高組織缺損修復的效果。

發明內容

為了克服上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種CSF復合PRF的雙膜結構的移植材料及其制備方法和用途，CSF?(cell?sheet?fragment)即細胞膜片片段，PRF(platelet-rich?fibrin)為富血小板纖維蛋白，本發明的移植材料能夠應用于如軟骨、軟組織缺損的修復及牙髓、牙周膜組織的再生，有效提高組織修復的效果。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案是：

一種雙膜結構移植材料，其特征在于：由干細胞膜片片段和富血小板纖維蛋白膜顆粒組成。

優選的，所述干細胞選自骨髓間充質干細胞、脂肪干細胞、牙髓干細胞或牙周膜干細胞。

優選的，所述富血小板纖維蛋白膜片顆粒經由血液離心后獲得。

優選的，細胞膜片采用六孔板進行制備，細胞膜片片段和富血小板纖維蛋白膜的比例如下：每張六孔板細胞膜片數量∶用于離心獲得富血小板纖維蛋白膜片的血液毫升數＝1∶3.5～4.0。

優選的，所述干細胞和富血小板纖維蛋白均來源于同一個體。

優選的，干細胞必須制備成細胞膜片片段的形式。

一種移植材料的制備方法，其特征在于其制備過程包括以下步驟：

第一步，干細胞膜片的培養：原代干細胞經擴大培養后接種于六孔板，待生長融合至80％時以膜片誘導液予以培養，3天換液一次，待細胞膜片周圍出現卷曲時認為細胞膜片成熟；

第二步，制備干細胞膜片片段：用機械剝離的方法將細胞膜片從培養皿中剝離，用無菌眼科剪將其剪碎，制備成細胞膜片片段(大小約0.5mm×0.5mm)；

第三步，提取富血小板纖維蛋白膜片顆粒：根據所需比例，以10ml為單位，將血液(不加任何抗凝劑)置于無菌玻璃離心管或塑料套管的玻璃離心管中，立即以3000rpm/min的速度離心10分鐘，靜置5分鐘后，無菌鑷鉗夾取出離心管中間部分的富血小板纖維蛋白凝膠，將其底部紅細胞端于無菌紗布上輕蘸以去除多余紅細胞，保留完整的淡黃色凝膠部分及底部少量粘附牢固的紅細胞，將后者平鋪置于無菌紗布之間，輕壓擠出其中液體成分，制備成一淡黃色堅韌膜狀結構，用無菌眼科剪將其剪碎，制備成大小約0.5mm×0.5mm×0.5mm的富血小板纖維蛋白膜片顆粒；

第四步，將制備的細胞膜片片段和富血小板纖維蛋白膜片顆粒置于無菌培養皿中，按照比例手動將其混勻，保證二者充分混合，即可得到干細胞膜片片段與富血小板纖維蛋白膜復合后形成的雙膜結構移植材料。

優選的，細胞膜片片段和富血小板纖維蛋白膜的比例如下：每張六孔板細胞膜片數量∶用于離心獲得富血小板纖維蛋白膜片的血液毫升數＝1∶3.5～4.0。

本發明的移植材料在口腔頜面部或全身中小范圍組織缺損修復中的應用。

本發明的移植材料在制備口腔頜面部或全身中小范圍組織缺損修復用移植材料中的用途。

本發明的移植材料與其他生物材料組成的復合材料在制備組織缺損修復用移植材料中的用途。